| 研究概要 |
本研究は、種々のイノシトールリン脂質代謝酵素に特異的なshRNAを安定発現する一群の細胞クローンを作成することにより、これらの酵素の機能ネットワークについての基礎情報をえる一方、信頼に足る欠損細胞バンクを構築することを目的としている。前年度においては、RAW264.7細胞及びRBL2H3細胞を親細胞としてクラスI型PI3Kの4種の触媒サブユニット(p110α、p110β、p110γ、p110δ)を欠損した株を作成した。また、RAW264.7細胞についてはクラスIII型PI3Kの触媒サブユニットVps34pの欠損株、PtdIns(3,4,5)P3代謝酵素(PTEN及びSHIP)の欠損株も作成した。本年度は、これらの細胞の機能解析を行う一方で、RBL2H3細胞を親細胞としてクラスII型PI3Kの欠損株、クラスI型PI3Kの制御因子Gab2の欠損株、また、RAW264.7細胞を親細胞としてクラスIII型PI3Kの制御因子p150、PI3P5Kの触媒サブユニットPIKFYVE、同制御サブユニットVac14の欠損株の作成を行った。前年度までに、RAW264.7細胞の食作用においてはp110αが特異的に機能していること、SHIP-1,PTENはいずれもこれを負に制御していることを発見していたが、本年度、取り込まれた食胞の細胞内輸送の過程においてはPTEN,PI3P5Kがいずれも重要な働きをしていることを新たに観察した。なお、本年度は誘導型shRNAを導入した細胞株の作成も企画していたが、やや難航しており、次年度の課題として残ることとなった。
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