難治性てんかんに関わるコンタクチン関連蛋白質の分子間相互作用の解析

2009 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20590149
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 武田 泰生 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 准教授 (60245462)
• 研究分担者: 山田 勝士 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 教授 (00037491)
• キーワード: てんかん / 神経接着分子 / Caspr2 / カリウムチャネル / 跳耀伝導 / トランスゴルジネットワーク

研究概要

難治性てんかん発症の一つに遺伝的背景があることが明らかとなり、その原因遺伝子の一つに神経接着分子でありミエリンのパラノード部に局在するCaspr2が同定された。Caspr2はKチャネルの局在化に重要な因子であることが知られている。これまでの本申請研究において、Two-hybrid法を用いて、Caspr2の細胞内部分と結合する分子としてcarboxypeptidase E(CPE)を同定した。今回の研究では、(1)GST-pull down法を用いて両分子が直接結合すること、(2)in vitro translation法を用いて細胞内領域同士が結合すること、(3)その結合にはCaspr2末端部のPDZドメイン結合領域を必要としないことを明らかにした。さらに、(4)抗Caspr2抗体及び抗CPE抗体を用いた免疫沈降実験により、ラット大脳皮質可溶性画分からお互いに免疫沈降されることを明らかにし、生体内における相互作用の可能性を示唆した。また、(5)各々の分子に対する子特異抗体を用いた免疫組織染色により大脳皮質第2, 3層のapical dendritesにCaspr2, CPE及びKv1. 1が存在し、これらの染色が重なることを明らかにした。さらに、(6)Caspr2及びCPEのcDNAsをCOS-7細胞に導入後、各種の細胞内小器官に対する特異マーカーと蛍光免疫二重染色を行った結果、いずれの分子もゴルジ装置に局在することが明らかとなった。以上の結果から、本年度研究において、Caspr2及びCPEはゴルジ装置に局在しKチャネル(Kv1. 1)の細胞移動に関与する可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Major vault protein forms complexes with hypoxia-inducible factor(HIF)-1α and reduces HIF-1α level in ACHN human renal adenocarcinoma cells (2010)
  • 著者名/発表者名: Iwashita, K., Ikeda, R., Takeda, Y., Sumizawa, T., Furukawa, T., Yamaguchi, T., Akiyama, S., Yamada, K.
  • 雑誌名: Cancer Sciences January(In press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Determination of teicoplanin through concentration target and appropriate total dose during the first 3 days : a retrospective study in patients with MRSA infections (2010)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto, K., Kanazawa, N., Ikawa, K., Fukamizu, T., Shigemi, A., Yaji, K., Shimodozono, Y., Morikawa, N., Takeda, Y., Yamada, K.
  • 雑誌名: Journal of Infection Chemotherapy March(In press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Preferential localization of neural cell recognition molecule NB-2 in developing glutamatergic neurons in the rat auditory brainstem (2009)
  • 著者名/発表者名: Toyoshima, M., Sakurai, K., Shimazaki, K., Takeda, Y., Nakamoto, M., Serizawa, S., Shimoda, Y., Watanabe, K.
  • 雑誌名: Journal of Comparative Neurology 531 ページ: 349-362
  • 査読あり
• [雑誌論文] Contactin-associated Protein(Caspr)2 interacts with carboxypeptidase E in the central nervous system (2009)
  • 著者名/発表者名: Oiso, S., Takeda, Y., Futagawa, T., Miura, T., Kuchiiwa, S., Nishida, K., Ikeda, R, Kariyazono, H., Watanabe, K, Yamada, K.
  • 雑誌名: Journal of Neurochemistry 109 ページ: 158-167
  • 査読あり
• [雑誌論文] Correlation between voriconazole trough plasma concentration and hepatotoxicity in patients with different CYP2C19 genotypes (2009)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto, K., Ikawa, K., Abematsu, K., Fukunaga, N., Nishida, K., Fukamizu, T., Shimodozono, Y., Morikawa, N., Takeda, Y., Yamada, K.
  • 雑誌名: International Journal of Antimicrobial Agents 34 ページ: 91-94
  • 査読あり
• [雑誌論文] Contribution of the neural cell recognition molecule NB-3 to synapse formation between parallel fibers and Purkinje cells in mouse. Developmental Neurobiol., Aug, 69(12) : 811-824 (2009)
  • 著者名/発表者名: Sakurai, K., Ueda, H., Matsubara, K., Takeda, Y., Karagogeos, D., Shimoda, Y., Watanabe, K.
  • 雑誌名: Developmental Neurobiology 69 ページ: 811-824
  • 査読あり
• [雑誌論文] Correlation between meropenem and doripenem use density and the incidence of carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa (2009)
  • 著者名/発表者名: Shigemi, A., Matsumoto, K., Yaji, K., Shimodozono, Y., Takeda, Y., Miyanohara, H., Kawamura, H., Orita, M., Nishi, J., Yamada, K.
  • 雑誌名: International Journal of Antimicrobial Agents 34 ページ: 589-591
  • 査読あり
• [雑誌論文] Deficiency of Neural recognition molecule NB-2 affects the development of glutamatergic auditory pathways from the ventral cochlear nucleus to superior olivary complex in mouse (2009)
  • 著者名/発表者名: Toyoshima, M., Sakurai, K., Shimazaki, K., Takeda, Y., Shimoda, Y., Watanabe, K.
  • 雑誌名: Developmental Biology 336 ページ: 192-220
  • 査読あり
• [学会発表] 癌浸潤・転移におけるコンタクチンの役割 (2010)
  • 著者名/発表者名: 益田将吾, 二川俊隆, 西田健太朗, 田畑祥, 藤井寛樹, 武田泰生, 山田勝士
  • 学会等名: 第83回日本薬理学会年会
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 20100316-20100318
• [学会発表] Contactin associated protein 1(Caspr1)の機能解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 藤井寛樹, 二川俊隆, 益田将吾, 石原義久, 鬼丸貴裕, 末廣淑子, 山口沙織, 武田泰生, 山田勝士
  • 学会等名: 第26回日本薬学会九州支部大会
  • 発表場所: 九州大学薬学部(福岡)
  • 年月日: 20091212-20091213
• [学会発表] 咽頭がん細胞KCP-4のシスプラチン耐性への細胞内シグナル伝達系の関与 (2009)
  • 著者名/発表者名: 大磯茂, 池田龍二, 中村和男, 武田泰生, 秋山伸一, 山田勝士, 仮谷薗博子
  • 学会等名: 第19回日本医療薬学会年会
  • 発表場所: 長崎ブリックホール
  • 年月日: 20091024-20091025
• [学会発表] Molecular mechanism for anti-cancer drug paclitaxel-induced neuropathic pain. -behavior and microaray analyses- (2009)
  • 著者名/発表者名: 武田泰生, 西田健太朗, 山田勝士
  • 学会等名: Asian Federation for Pharmaceutical Sciences 2009
  • 発表場所: 九州大学百年記念会堂
  • 年月日: 20091015-20091018
• [学会発表] 神経接着分子コンタクチンを介した癌浸潤・転移機構の解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 武田泰生, 益田将吾, 二川俊隆, 西田健太朗, 田畑祥, 藤井寛樹, 山田勝士
  • 学会等名: 医療薬学フォーラム2009/第17回クリニカルファーマシーシンポジウム
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 20090711-20090712
• [学会発表] 神経接着関連分子 Contactin associated protein(Caspr)4の機能解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 二川俊隆, 益田将吾, 藤井寛樹, 鬼丸貴裕, 末廣淑子, 山口沙織, Zhong-can Chen, 武田泰生, 山田勝士
  • 学会等名: 第62回日本薬理学会西南部会
  • 発表場所: リジェール松山
  • 年月日: 2009-11-27
• [学会発表] 神経接着分子コンタクチンを介した癌浸潤・転移のメカニズム (2009)
  • 著者名/発表者名: 益田将吾, 二川俊隆, 西田健太朗, 田畑祥, 藤井寛樹, 武田泰生, 山田勝士
  • 学会等名: 第62回日本薬理学会西南部会
  • 発表場所: リジェール松山
  • 年月日: 2009-11-27
• [学会発表] (2009)
  • 著者名/発表者名: 武田泰生
  • 学会等名: 2009 China-Japan Pharmacists' International Forum
  • 発表場所: Beijing, China
  • 年月日: 2009-11-14