| 研究課題/領域番号 |
20590248
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
木村 定雄 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (40134225)
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| 研究分担者 |
粕谷 善俊 千葉大学, 大学院・医学研究院, 准教授 (70221877)
西山 真理子 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教 (00092081)
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| キーワード | G蛋白質共役受容体 / GPCR / オーファン受容体 / 生理活性ペプチド / ゲノム構造 / バイオインフォーマティクス |
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| 研究概要 |
本研究は、生理活性ペプチドにはC末端部アミドを持つ例が多いことに注目し、ヒトゲノムDNA配列情報より、すべてのアミド型のGPCRの新規生理活性ペプチドリガンド探索を行う。特に、ロドプシン型受容体βグループのオーファン受容体に焦点を当てて研究を行った。(1)ヒトゲノムデータベース等のBankに登録されたDNA配列(33.119個)の情報から、独自に開発したコンピューター検索ソフトにより、C末端部にアミドを持つ生理活性ペプチド候補(352個)を予測抽出した。(2)アミド型活性ペプチド候補(リガンドライブラリー)を約200個化学合成した。(3)次に、ロドプシン型受容体βグループに属するオーファン受容体遺伝子9個を取得し、安定発現細胞に導入した。(4)ブタ脳の酸-アセトン抽出物より、ペプチド性分画を取得し、逆相系HPLCにより360分画に分離した。(5)活性測定(スクリーニング)系として、オーファン受容体の発現細胞を用いて、fura-2/AMを用いた細胞内Ca^<2+>や濃度変化を追跡した。(6)今年度は、オーファン受容体、ヒトGPR176を用いて、スクリーニングを行ったが、合成ペプチド約200個、およびブタ脳抽出物の分画物の中には、活性を持つ物が検出できなかった。引き続いて、他のオーファン受容体の発現細胞を用いてスクリーニングを継続中である。
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