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プロラクチン(PRL)分子の多様性の研究において、PRL、がペプチダーゼによって切断されて生じる16kDa PRL N端フラグメントが最近注目されている。全長PRLが血管内皮細胞増殖抑制に作用するのに対し、16K PRLは血管内皮細胞増殖を抑制する。本研究では、免疫系における16Kフラグメントの作用、分泌調節、受容体の構造、細胞内情報伝達機構を明らかにし、この生理活性ペプチドが免疫不全症や自己免疫疾患に対する薬物療法の標的と成るかどうかを検討する。
1、 16kDa PRLの合成
pGEX 6P-1システムを用いて大腸菌でGST癒合ヒトPRL 16kDaフラグメントを作製し、Precision proteaseで消化して16kDa PRLのみを得た。収量は1回400mLの大腸菌の培養で約100μgのペプチドが得られた。
2、 Nb2 rat lymphoma cell lineの立ち上げ
PRLの受容体を持ち、PRL濃度に依存して増殖するラットT細胞系のNb2 lymphoma cell lineをおこして培養し、PRLに対する反応性を検討した。細胞増殖反応はWSTアッセイ系を用いて行った。NB2細胞はPRL0.01ng/mLから用量依存的に増加反応を示し、5-10ng/mLで最大反応を示した。
3、 16kDa PRLのNb2細胞増殖に対する作用の検討
16kDa PRLは1nM-10nMの濃度でPRL(1.0ng/mL)に対するNb2細胞増殖に対して抑制作用は示さなかった。また、Nb2細胞のPRL(-)時の生存率にも効果は認められなかった。
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