| 研究概要 |
ヒト発がんにおいてはDNAメチル化異常が重要なことが明らかになっている。しかし、DNAメチル化異常を誘発する環境因子・生体内分子についての知見は限られており、個体レベルでの解析が重要になると考えられる。本研究では、メチル基転移酵素Dnmt3bの発現が誘導可能なトランスジェニックラットを作成し、Dnmt3bの高発現が悪性度の高い腫瘍の誘発に関与するか否かを明らかにすることを目的とした。昨年度までに発現調節型ラットDnmt3b2トランスジーンセットを作成した。任意の時期にDNAメチル化を誘発し、Dnmt3b過剰発現による胎生致死を避けるためにTET-OFF-systemを活用した。ドキシサイクリン(DX)投与によるDnmt3b2発現抑制を可能にするために2個の発現ベクター((1)制御因子tTA2を各組織で発現させるために用いる、EEF1A1-tTA2ベクター、(2)DNAメチル化による不活化を避けるためにCpG配列を無くしたnon CpG-minCMVプロモーターおよびTet応答配列の下流にラットDnmt3b2 cDNAを連結した
non-CpG-pTRE2-Dnmt3b2ベクター)を構築した。EEF1A1-tTA2ベクターが正常に機能することを細胞株を用いて確認した。本年度は、作製した動物の応用可能性を広げるため、動物種をマウスに変更した。
non-CpG-pTRE2-Dnmt3b2ベクターのDnmt3b2をマウスcDNAに置換し、細胞株を用いてDX非存在下でマウスDnmt3b2 mRNAが発現することを確認した。本研究費は本年度で終了するが、今後、これらのベクターを用いて、Dnmt3b2発現のON,OFFが制御可能なトランスジェニックマウスの作成を進める。これにより、DNAメチル化異常を促進・抑制する環境因子・生体内分子の評価が容易になると考えられる。
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