抗体のクラススイッチ誘導に必須の遺伝子の同定

2010 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20590490
• 研究機関: 長浜バイオ大学
• 研究代表者: 新蔵 礼子 長浜バイオ大学, バイオサイエンス学部, 教授 (50362471)
• キーワード: 抗体 / クラススイッチ / 体細胞突然変異 / AID / DNA組み換え

研究概要

(研究目的)Activation-induced cytidine deaminase(AID)は抗体遺伝子のクラススイッチ(CSR)と体細胞突然変異(SHM)に必須の遺伝子である。その機序はDNA切断であることはわかっているが、AIDの標的がDNAであるか、RNAであるか、結論が得られていない。本研究ではAIDノックアウトB細胞ラインを樹立して、AID以外のcDNA(おそらくAIDにより編集されたcDNA)でCSRをレスキューできることを示し、AIDの標的がDNAではなく、RNAであることを証明し、かつAIDの標的RNAをクローニングすることを目的とする。
(研究結果)現在、世界で使われているB細胞ラインのうち、もっとも効率良くCSRを誘導できるB細胞ラインはCH12であるが、ノックアウトの頻度は5000分の1程度と推定されており、実際にノックアウト細胞を樹立できなかった。そのためAIDノックアウトマウスのB細胞でスクリーニングを行った。サイトカイン刺激でCSRを誘導した野生型マウスの脾臓B細胞からmRNAを分離し、AID mRNAをサブトラクトした後、cDNA libraryを作成した。library由来のcDNAによりCSRをレスキューされたAIDノックアウトB細胞を分離し、導入された遺伝子の検索を行っている。このスクリーニングで得られた候補遺伝子がCSRに必須の遺伝子であるかどうか、またAIDのターゲットmRNAであるかどうか、の確認実験が課題として残ったが、現在進行中である。

研究成果

• [雑誌論文] Mice carrying a knock-in mutation of Aicda resulting in a defect in somatic hypermutation have impaired gut homeostasis and compromised mucosal defense. (2011)
  • 著者名/発表者名: Wei M, Shinkura R, Doi Y, Maruya M, Fagarasan S, Honjo T.
  • 雑誌名: Nature Immunology 巻: 12 ページ: 264-270
  • 査読あり
• [雑誌論文] AID-induced T-lymphoma or B-leukemia/lymphoma in a mouse BMT model. (2010)
  • 著者名/発表者名: Komeno Y, Kitaura J, Watanabe-Okochi N, Kato N, Oki T, Nakahara F, Harada Y, Harada H, Shinkura R, Nagaoka H, Hayashi Y, Honjo T, Kitamura T.
  • 雑誌名: Leukemia 巻: 24 ページ: 1018-1024
  • 査読あり
• [雑誌論文] 免疫グロブリンの体細胞突然変異・クラススイッチとAIDおよびその関連分子 (2010)
  • 著者名/発表者名: 新蔵礼子
  • 雑誌名: 臨床免疫・アレルギー科 巻: 54 ページ: 72-79
• [学会発表] Knock-in mice carrying a somatic hypermutation-defective AICDA mutation have compromised mucosal defense and impaired gut homeostasis. (2010)
  • 著者名/発表者名: Shinkura R, Wei M, Honjo T.
  • 学会等名: 14^<th> International Congress of Immunology
  • 発表場所: Kobe, Japan
  • 年月日: 2010-08-26
• [備考]
  • URL: http://www.nagahama-i-bio.ac.jp/news/news/2011/01/post_107.html