高感度同時検出発光酵素イムノアッセイの開発と3種歯周病原因菌の検出への応用

2010 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 20590584
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 昭和大学
• 研究代表者: 伊藤 克敏 昭和大学, 薬学部, 准教授 (20223141)
• 研究期間 (年度): 2008 – 2010
• キーワード: イクオリン / ルシフェラーゼ / ペルオキシダーゼ / 生物発光 / 化学発光 / 同時検出 / イムノアッセイ / 歯周病菌遺伝子

研究概要

代表的な歯周病菌であるPorphyromonas gingivalis(Pg菌)、Aggregatibacter actionomycetemcomitans(Aa菌)、Treponema denticola(Td菌)の3種の歯周菌遺伝子の検出をPCR法及びイクオリン(Aq)、ビオチン化ルシフェラーゼ(b-luc)、西洋わさびペルオキシダーゼ(HRP)の3成分同時検出生物化学発光検出イムノアッセイを組み合わせた方法で行った。
歯周病菌遺伝子のMultiplex PCRの増幅産物を希釈し三成分同時発光検出酵素イムノアッセイにより歯周病菌遺伝子の検出したところ,Pg菌、Aa菌ではPCR増幅産物の12800倍希釈まで,Td菌では3200倍希釈までそれぞれ検出可能であった。

研究成果

• [雑誌論文] Simultaneous multiplex bio- and chemiluminescent enzyme immunoasaay for PCR products derived from genetically modified Papaya (2009)
  • 著者名/発表者名: Ito k, Tanaka Y, Maeda M, Gomi K, Inouye S, Akiyama H, Arakawa H
  • 雑誌名: BIOLUMINESCENCE and CHEMILUMINESCENCE ページ: 197-201
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a novel bioluminescent assay for nitric oxide by using soluble guanylate cyclase (2009)
  • 著者名/発表者名: Sano Y, Seki M, Suzuki S, Abe S, Ito K, Arakawa H
  • 雑誌名: BIOLUMINESCENCE and CHEMILUMINESCENCE ページ: 109-112
  • 査読あり
• [雑誌論文] メチレンジオキシアンフェタミン(MDA)抗体の作成とその抗体の関連化合物との反応性 (2008)
  • 著者名/発表者名: 田中佐知子,渡辺紫織,古家恵子,野村琢磨,貝崎明日香,伊藤克敏,鳥居塚和生,荒川秀俊,伊田喜光,吉田武美
  • 雑誌名: 法科学技術 13 ページ: 125-132
  • 査読あり
• [学会発表] イクオリン,ガウシアルシフェラーゼ,アクリニジウムエステルを組み合わせた超高速3成分同時発光分析法の構築 (2011)
  • 著者名/発表者名: 名取あゆみ,伊藤克敏,井上敏,荒川秀俊
  • 学会等名: 日本薬学会131年会
  • 年月日: 20110300
• [学会発表] 希土類蛍光標識試薬を用いる時間分解蛍光検出液体クロマトグラフィーの検討 (2011)
  • 著者名/発表者名: 丸山真一,伊藤克敏,荒川秀俊
  • 学会等名: 日本薬学会131年会
  • 年月日: 20110300
• [学会発表] 歯周病菌遺伝子検出のための三成分同時生物化学発光検出酵素イムノアッセイの検討 (2010)
  • 著者名/発表者名: 伊藤克敏,大久保俊介,五味恵子,井上敏,五十嵐武,荒川秀俊
  • 学会等名: 第23回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • 年月日: 20100700
• [学会発表] 歯周病菌遺伝子検出のための 三成分同時生物化学発光検出酵素イムノアッセイの検討 (2010)
  • 著者名/発表者名: 大久保俊介,伊藤克敏,五味恵子,井上敏,五十嵐武,荒川秀俊
  • 学会等名: 日本薬学会130年会
  • 年月日: 20100300
• [学会発表] イクオリンを検出に用いる生物発光アプタマーバインディングアッセイの検討 (2009)
  • 著者名/発表者名: 伊藤克敏,館由紀子,井上敏, 荒川秀俊
  • 学会等名: 第22回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • 年月日: 20090700
• [学会発表] 生物発光検出アプタマーバインディングアッセイを用いた活性化血液凝固第X因子の活性測定への応用 (2009)
  • 著者名/発表者名: 館由紀子,伊藤克敏,井上敏,荒川秀俊
  • 学会等名: 日本薬学会129年会
  • 年月日: 20090300