| 研究課題/領域番号 |
20590858
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| 研究機関 | 浜松医科大学 |
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研究代表者 |
林 秀晴 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50135258)
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| 研究分担者 |
佐藤 洋 浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (30293632)
加藤 秀樹 浜松医科大学, 医学部, 助教 (80314029)
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| キーワード | 一酸化窒素(NO) / ミトコンドリア膜透過性(mPTP) / ミトコンドリア膜電位(ΔΨm) / 共焦点レーザー顕微鏡 / NOドナー / ジスルフィド結合 / チオール基 / ニトロシル化 |
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| 研究概要 |
一酸化窒素(NO)がミトコンドリア膜透過性(mPTP)に及ぼす効果を検討した。〔方法〕ラット心筋細胞膜の除去処理をして細胞内液で灌流した。ミトコンドリア膜電位(ΔΨm)の測定にはTMREを、mPTP開口の評価にはcalceinを用い、NOドナーのspermine NONOate投与時の変化を、共焦点レーザー顕微鏡で観察した。〔結果〕(1)高濃度NONOate(500μM)によるΔΨmの脱分極は、NOのscavengerであるcarboxy-PTIOの投与またはcyclosporineAにより抑制された。(2)高濃度NONOateにより、calceinの蛍光強度が低下し、mPTPの開口が示唆された。(3)低濃度NONOate(0.5-50μM)はatractylosideによるmPTPの開口とΔΨmの脱分極のいずれも抑制した。(4)ONOO-阻害薬であるMn-TBAPは、高濃度NOによるmPTP開口のみを抑制した。(5)チオール基をアルキル化するN-ethylmaleimide(NEM)は、高濃度、低濃度NOの効果を共に抑制した。(6)ジスルフィド結合(SS結合)を還元するdithiothreitol(DTT)は、高濃度NOによるmPTP開口のみ部分的に抑制した。(7)チオール基のニトロシル化を還元するアスコルビン酸は、低濃度NOによるmPTP開口抑制効果のみを軽減した。〔考察〕NOは、高濃度ではmPTPの開口効果、低濃度では抑制効果を示し、高濃度、低濃度のNOのmPTPの効果はNEMにより抑制され、チオール基の関与が示唆された。高濃度NOのmPTP開口効果は、Mn-TBAP、DTTの投与により抑制され、ONOO-によるSS結合が関与すると考えられた。低濃度NOのmPTP開口抑制効果はアスコルビン酸により抑制され、ニトロシル化が関与していると考えられた。
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