| 研究課題/領域番号 |
20590938
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| 研究機関 | 久留米大学 |
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研究代表者 |
桑野 剛一 久留米大学, 医学部, 教授 (60215118)
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| 研究分担者 |
木田 豊 久留米大学, 医学部, 助教 (30309752)
清水 隆 久留米大学, 医学部, 助教 (40320155)
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| キーワード | Mycoplasma pneumoniae / 肺炎 / リポプロテイン / TLR / 感染症 |
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| 研究概要 |
本年度、in vivoにおけるリポプロテインFAMの機能解析を行い、次の成果を得た。
(1) FAMを検出するために、FAMのアミノ酸配列から抗体エピトープ1を選択し、当該合成ペプチドの免疫により、ウサギポリクローナル抗体を得た。さらに抗体エピトープ2を選択し、同様にモルモットポリクローナル抗体を得た。これらの抗体はウエスタンブロットで、FAMを検出した。また、サンドイッチELISAをウサギ抗体をCA(吸着)抗体、モルモット抗体をDE(検出)抗体とすることにより構築し、FAM抗原を検出することができた。M. pneumoniae生菌を検出するためには、界面活性剤による処理が必要であった。M. penetrans、M. genitaliumとは反応しなかった。さらに、生菌を標的抗原として感度を検討したところ、200CFU前後まで、検出可能であった。in vivoの急性感染系におけるM. pneumoniae感染マウスの気管支肺胞洗浄液(BALF)中のFAM抗原を検出できた。
次に、M. pneumoniae感染細胞系で、ウサギポリクローナル抗体を使った免疫蛍光抗体法でFAMの検出を行った。M. pneumoniae感染細胞、および分離したFAM処理細胞で、シグナルは弱いがFAMを検出した。感染マウス肺組織でも同様に、免疫蛍光抗体法を試みたが、検出できなかった。
(2) in vivoにおけるFAMの機能解析を行った。FAM20を経鼻的に投与すると、24時間後に気管支周囲に炎症細胞の著明な浸潤を認めた。一方、FAM20を腹腔内、あるいは静脈内へ投与してもマウスが致死することはなかった。この結果は、生体内では、リポプロテインは血清中の未知物質等により、その炎症誘導活性が中和されている可能性を示した。
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