| 研究概要 |
遺伝子発現～蛋白レベルでのヒトES細胞から腎臓前駆細胞への分化誘導条件を検討する。
ヒトES細胞は京都大学再生医科学研究所から分与されたKhES-1、KhES-2、KhES-3を用い、維持培養には京大からプロトコール(version 1.1/2006.05.15)に従う。昨年度はFeeder細胞から剥がしたヒトES細胞を、2次元培養のみならず、いわゆるembryobody形成に用いられる浮遊培養、合成ハイドロゲル(メビオールジェル:メビオール社)、コラーゲングル(Cell Gen : KOKEN)等の3次元培養素材を用いて培養し、これにepigenetics制御薬であるHDAC阻害薬(TSA,SAHA,バルプロ酸)や脱メチル化剤(5-azacytidine)を添加することによる遺伝子発現変化を検討した。その結果、TSAおよび5-azacytidineにより、腎臓発生関連遺伝子であるWT-1が100-200倍上昇することが明らかとなったが、本年度はこの条件を基に、FACS解析により、蛋白レベルでの分化誘導を検証した。
5-Azacytidine, 5-Aza-2'-deoxycytidine処理後、未分化マーカー(TRA-1-60,TRA-1-81,OCT)、分化誘導マーカーとしてはcadherin-11, WT-1,Pax-2, and Wnt-4を用いてFACS解析を行った結果、5-Aza-2'-deoxycytidineが効率良くWT-1蛋白を誘導し、腎臓構成細胞への分化誘導剤として、最も有望であること明らかとなった。
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