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申請代表者は脱リン酸化酵素SHP1/2を細胞膜につなぎ止める働きをするSIRPα分子が糸球体足細胞に特異的に発現しており、そのリガンドであるCD47 は足細胞に発現せず、メサンギウム細胞に発現していることを見いだした。本研究においてSIRP-α-CD47系が糸球体構成細胞間のシグナル伝達に関与していることを明らかにすることを目的として病態モデル動物を用いて以下のような解析を計画した。
1)申請者らは硫酸プロタミン(PS)で腎臓を灌流することでスリット膜領域の分子がチロシンリン酸化を受けることを見いだしている。このPS灌流腎を用いて足細胞の形態変化に伴う分子群(特にスリット膜関連分子と細胞膜蛋白および細胞骨格に注目する)の局在とSIRPαのリン酸化について生化学および組織学的な解析する。
2)メサンギウム細胞傷害を誘発するモノクローナル抗体E30をラットに投与することにより、メサンギウム細胞が補体依存的に傷害された後にSIRPαおよびSHP1/2のリン酸化に変化があるかどうかを免疫沈降法とイムノブロット法により解析する。
3)SIRPαとスリット膜分子との結合について解析を行う。スリット膜分子の発現が変化するPAN腎症や5-1-6腎症モデルを用いて、ネフリンとSIRPαの関係を明らかにする。
4)SIRPαが結合する脱リン酸化酵素であるSHP1/2の糸球体における局在を明らかにし、SIRPαとの関係を詳細に解析する。
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