| 研究概要 |
【目的、計画】本研究は本態性高血圧の20~70%を占めるとされる食塩感受性高血圧形成への腎内カリクレイン分泌の役割を明らかにするために、腎接合尿細管、初期集合管に限局して合成、分泌されるカリクレインの尿中分泌低下について単離接合尿細管細胞内における機序および尿中カリクレイン分泌低下多型保有者における尿中ナトリウム排泄能について明らかにすることである。今年度は(1),(2)を検討した。
(1)若齢SHR、 WKYを用いてカリクレイン分泌低下の遺伝要因として細胞内Ca動態の相違
(2)接合尿細管細胞の不死化細胞の作成と各種分泌刺激によるカリクレイン分泌機序
(3)健康人でのカリクレイン分泌低下を示すカリクレイン多型検索と多型保有者でのNa排泄能
実体顕微鏡下マイクロダイセクションによる接合尿細管単離を行い培養に供した。
【成果】(1)高血圧モデルラットSHRおよび同系統の正常血圧ラットWKYから得た単離接合尿細管をカバーガラス上に初代培養し、カリクレイン分泌刺激薬による細胞内カルシウム動態を測定した。得られた成果として、両動物由来の接合尿細管細胞においてバゾプレッシン100pM~100nMの濃度範囲において用量依存性に細胞内Ca濃度の増加が示され、 SHR由来細胞では用量反応曲線が左にシフトする傾向があった。現在細胞上清中のカリクレイン活性測定を試みている。(2)接合尿細管には2種の細胞である接合尿細管細胞と介在細胞が約6:4の割合で混在していることが報告されている。従って、不死化遺伝子の温度感受性SV40ラージT抗原導入ラットから接合尿細管を単離培養し、限界希釈法により接合尿細管細胞の単離を試みている。
本研究方法および得られた成果は、今後、高血圧形成におけるカリクレイン分泌低下を中心とした腎接合尿細管の寄与を明らかにしていく上で重要なもの考える。腎遠位尿細管の機能変化による高血圧形成の要因を明らかにすることは食塩感受性高血圧に対する新たな治療薬開発に結びつく意義がある。
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