| 研究課題/領域番号 |
20591061
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
奥屋 茂 山口大学, 大学院・医学系研究科, 准教授 (20214083)
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| 研究分担者 |
松原 淳 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (40311815)
竹田 孔明 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (60467793)
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| キーワード | 糖尿病 / 蛋白 / GLUT4 / インスリン / 糖取り込み調節 |
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| 研究概要 |
GLUT4のリサイクリング・トランスロケーション調節に関与すると予想される“GLUT4結合蛋白"のスクリーニングから始まった研究で、蛋白-蛋白結合に関与する“ANK構造"蛋白p61と、GPIアンカー蛋白p69が同定された。これらを3T3-L1脂肪細胞に強制発現させると、インスリン依存性糖取り込みが促進すること等も明らかとなり、p61・p69のさらなる機能解析を進めている。
3T3-L1脂肪細胞の免疫組織化学・共焦点顕微鏡観察で、p61は細胞質内に、p69は細胞膜上に存在し、いずれも部分的にGLUT4と共存した。なお、p61・p69ともにインスリン刺激後の局在変化は明らかではなかった。次に、p61・p69とGLUT4とが各々どの部位で結合するかを検証するため、種々変異体発現ベクターを作製し、酵母two-hybridシステムへ再構築を行い、各変異体での結合の有無を検討している。一方、3T3-L1脂肪細胞を膜分画(Triton可溶化+非可溶化“ラフト"分画)、細胞質分画等に分画化し、ウエスタン解析を行ったところ、p69はラフト分画に存在した。
インスリン刺激後は、ラフト分画のGLUT4発現量も増加していた。したがって、p69がラフト分画のGLUT4発現量を調節している可能性を考え、p69過剰発現(あるいはノックダウン)細胞で、各分画のp69とGLUT4蛋白発現量の検討を進めている。
また、3T3-L1脂肪細胞p61をノックダウンすると、インスリン依存性糖取り込みが減弱した。同様の実験をp69でも行えるように試みている。さらに、インスリン抵抗性状態を示唆する高グルコース・高インスリン条件下で3T3-L1脂肪細胞を培養すると、p61発現量が減少することが、mRNAや蛋白質レベルで確認された。同様の検討をp69においても進めていて、肥満・インスリン抵抗性モデルマウスにおいて、p61・p69発現変化が起こるか否かも解析中である。
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