| 研究概要 |
マウス心筋細胞株(HL-1)を用いて、カルノシン酸(CA)の抗酸化作用の有効性を検討した。陽性コントロールとして、マウス肝細胞細胞株(Hepa1-6,NCTC1498)を用いた。細胞株にCAを添加して24時間培養後、アセトアミノフェン(AA)を加えてさらに24時間培養した。MTT法を用いて生存率を測定した。
HL-1においては、CA非存在下ではAAの酸化作用により、AA 0μM 100%とすると、AA 0.78mM 86.4%、1.56mM 82.9%、3.13mM 73.1%、6.25mM 59.1%と生存率の低下をみたが、CA 1.0μM存在下ではそれぞれ96.1%、93.8%、82.4%、65.7%と生存率の低下が軽度であった。Hepa1-6においては、CA非存在下ではAAの酸化作用により、AA 1.56mM 89.6%、3.13mM 85.26%、6.25mM 85.9%、12.5mM 78.4%と生存率の低下をみたが、CA 2.5μM存在下ではそれぞれ99.3%、98.2%、94.8%、86.9%と生存率の低下が軽度であった。NCTC1498においてもCA非存在下では、AA 0.39mM、0.78mM、1.56mMでは、生存率がそれぞれ72.1%、47.5%、35.4%であったが、CA 10μM存在下ではそれぞれ94.2%、58.1%、39.8%であった。これらから、マウス心筋細胞はCA濃度が0.5~1.0μM存在下で抗酸化作用を示したのに対し、肝細胞では、CA濃度が2.5~10μMが必要であった。AAの酸化作用はphase II enzymeによって酸化中和作用をもたらすので、これらの細胞株のphase II enzymesの発現をRT-PCR法によって定量した。さらにCA存在下で培養し同様な方法でphase II enzymesの発現を定量した。Phase II enzymesとして、NQO-1,GCL-h,GST-Ya,HO-1を用いた。内部標準としてGAPDH,Cycrophyを用いた。HL-1ならびにNCTC1469細胞はCA添加(0.5,5μM)前後ではphase II enzymesの発現に差異は認められなかった。これらの結果により、CA添加により、AAの酸化作用を軽減したのは、phase II enzymesの発現によらない可能性が示された。
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