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本研究の目的は、ヒト抗菌ペプチドの一種であるhBD3およびhCAP18/LL37の遺伝子を組み換えウイルスベクターを用いてヒト皮膚細胞へ導入し、抗菌活性の高い培養皮膚の作製を試みることである。hBD3の組み換えウイルスベクターは既に作製して機能を確認してある。
本年度は、hCAP18/LL37遺伝子のクローニングと組み換えウイルスベクターの作製を行った。
(1)IL-1にて刺激したヒト培養表皮細胞を用い、RT-PCR法によりhCAP18/LL37のc-DNAをクローニングした。さらにhCAP18c-DNAの組み換えアデノウイルスベクターを作製した。
(2)上記ウイルスベクターを293細胞に感染させ、導入遺伝子の発現および培養液の抗菌活性を計測した。
(3)RT-PCRにより遺伝子導入細胞にhCAP18の発現が確認された。遺伝子導入細胞の培養液はP.aeruginosaおよび多剤耐性P.aeruginosa(MDRP)に対して殺菌的抗菌活性を示した。
以上の研究によって、作製したhCAP18/LL37組み換えウイルスベクターの機能が確認された。来年度以降は、さらにウイルスの力価を上げたうえで、ヒト培養表皮細胞・線維芽細胞への遺伝子導入を行い、当該遺伝子導入細胞からの抗菌ペプチドLL37の分泌を確認し、各種菌株に対する抗菌活性の測定を行う。また同時に、hBD3とhCAP18/LL37の遺伝子をタンデムに連結したウイルスベクターを作製する予定である。
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