| 研究概要 |
本研究では慢性疼痛動物モデルにL5脊髄神経絞扼ラット(Chung model)を用い、HVJ-liposome法を利用してデコイ型核酸NF-κBを神経系に遺伝子導入後、温熱刺激や機械的刺激に対する疼痛反応を観察することで慢性疼痛におけるNF-κBの役割を明らかにする。これまでに我々はL5脊髄神経絞扼ラットの脊髄神経節レベルに遺伝子導入することで温熱刺激に対する痛覚過敏を抑制することを確認(Sakaue, et al. Neuroreport 2001)してきた、脊髄腔内にデコイ型NF-κBを投与し、マイクログリア、アストロサイト等の活性化メカニズムと痛覚過敏との関与を検討する。
1) 組織科学的検索、導入遺伝子の分布範囲の確認
導入した遺伝子の分布を検索するために神経因性疼痛モデルの神経系に蛍光標識をした核酸をHVJ-liposome法を用いて導入する。神経標本を採取し、固定し薄切標本を作製後、蛍光顕微鏡(現有)を用いて分布範囲を観察する。また、グリア細胞活性の指標としてグリア細胞特異的なマーカー(OX42 : microglia, GFAP : astrocyte)を免疫組織科学的方法で検索する。NF-κBデコイ型核酸導入前後での検索を行った。
2) サイトカイン特異的mRNAの定量
ラット神経因性疼痛モデルの脊髄において、局所で産生されるサイトカインをNF-κBデコイとScrambleデコイ群の2群で蛍光標識ハイブリダイゼーションプローブを用いた定量PCR(Woo, et. al. J. Clin. Microbiol, 1997)ライトサイクラー^<TM>を用いて定量した。TNF-α,IL-1β等のサイトカイン、グリア細胞活性化に関与するとされるP2X4受容体、TLR-2(Toll-like receptor2)についても定量を行った。
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