| 研究分担者 |
戸澤 啓一 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 准教授 (40264733)
伊藤 恭典 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 研究員 (70295608)
岡田 淳志 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 助教 (70444966)
郡 健二郎 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 教授 (30122047)
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| 研究概要 |
尿路結石形成の初期には細胞障害が起こり、酸化ストレスがその原因になっていると考えられる。細胞内のミトコンドリアの損傷によって活性酸素が発生することが知られており、結石形成時の細胞障害、ミトコンドリアの機能、マトリクス蛋白の機能について詳細に検討することで、結石形成機序を解明し、予防法の確立に活用することを目的とした。
1.結石形成時の尿細管細胞微細構造の観察:結石形成時の尿細管微細構造の観察と尿路結石マトリクス蛋白であるオステオポンチン(OPN)蛋白の局在の変化について検討した。尿路結石モデルマウスとしてグリオキシル酸を腹腔内投与し、1, 3, 6, 9, 12, 24, 48時間後にsacrificeし、腎臓を摘出、透過型電子顕微鏡で観察し、尿細管微細構造、とくにミトコンドリアと細胞膜について経時的変化を観察した。
2.結石形成時の酸化ストレスとミトコンドリア活性の測定:結石モデルラット薬剤負荷、1, 3, 6, 9, 12, 24, 48時間後に腎臓を摘出し、酸化ストレスの発現を見るために、superoxide dismutase(SOD)、 malondialdehyde (MDA)について免疫染色を行った。培養腎尿細管細胞にシュウ酸カルシウム結晶を添加し、1, 2, 4, 12時間後に、ミトコンドリア膜貫通蛋白群(MPTP)の開口について検討した。
3. OPNノックアウトマウスと変異OPN発現トランスジェニックマウスを用いたOPN機能部位の解析と酸化ストレスとの関係:OPN-KOマウスと変異OPNトランスジェニックマウスを交配し、wild type由来のOPNの発現はノックアウトされているものの、トランスジェニックマウス由来のそれぞれのOPNを発現する遺伝子組み換えマウスを作成した。蓚酸前駆物質であるグリオキシル酸100mgを腹腔内投与して結石形成を行い1, 3, 6, 9, 12, 24, 48時間後にsacrificeし、腎を摘出していた。結右形成とOPN発現の関係を明らかにする予定である。
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