研究概要 |
ヒト胚および絨毛の脱落膜への侵入に際し、絨毛と脱落膜の接点において、胚由来のPAFが血管新生のいかなる制御に関わっているかを明らかにすることを目的として研究を計画した。 子宮筋腫摘出時に採取された子宮内膜を細切後、0.25% collagenase処理し、遠心し、その後60μmメッシュを通過させて子宮内膜腺細胞と間質細胞を分離した。間質細胞をMPAおよびdb-cAMPとともに培養し、脱落膜化させる。培養上清のprolactinの産生を脱落膜化の指標とした。また、初期妊娠や子宮外妊娠の子宮内容除去術時に採取された絨毛及び脱落膜を同様にcollagenase処理し、非連続的比重遠心法により脱落膜細胞を分離した。得られた間質細胞、および、脱落膜細胞を10% FCS加PRMIまたはIMDMの培養液で2×10^5 cells/wellづつ培養した。 PAF受容体は、G-protein coupling typeの受容体であり、細胞内情報伝達系として、その機能に応じて種々の経路の関与が示唆されている。これらの経路のうち、血管新生の制御においてどの経路が中心的役割を担っているかを検討した。Protein kinase C (PKC)のactivator (TPA : positive control)やinhibitor (H-7)、あるいは、PKAのactivator (db-cAMP : positive control)やinhibitor (Rp-cAMPS)を脱落膜細胞培養系において、PAFとともに、あるいは単独で添加し、VEGF, basic FGF, HGF, angiogeninおよびTSP-1の産生に変化がみられるかどうかを検討した。結果を解析中である。
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