| 研究概要 |
我々はヒト耳介より「ヒト弾性軟骨間葉系前駆細胞」である軟骨膜細胞を分離、培養することに成功している。本細胞を用いた軟骨再生医療のためには、この軟骨膜細胞の特性解析の推進および3次元形態を有する再生軟骨の再構築が必要である。本年度では、軟骨膜細胞の特性解析のために、(1)細胞増殖能、(2)多分化能、(3)自己再生能のうち(1),(2)について軟骨細胞と比較し分析した。(1)細胞増殖能:コロニーアッセイと長期細胞増殖能を比較検討した。コロニーアッセイでは、軟骨膜細胞は23.9±4.5個、軟骨細胞2.3±0.4個のコロニーを形成し、軟骨膜細胞は高いコロニー形成能を有していた。長期増殖能において軟骨膜細胞は、軟骨細胞に比べ約1000倍高い増殖能を維持し続けた。(2)多分化能:軟骨、脂肪、骨分化誘導を行った。まず、軟骨分化誘導培地にて培養すると、両者ともに組織学的にプロテオグリカン、II型コラーゲンに染色された。 ELISAによるプロテオグリカン、エラスチン、コラーゲンの定量解析では、軟骨膜細胞は17.5±4.3、235.6±19.9、61.8±7.5μg/mlであり、軟骨細胞は19.0±1.3、234.0±16.3、55.8±4.9μg/mlであり同様であった。一方、脂肪分化では、軟骨膜細胞は脂肪滴を形成しOilred0にて染色されたが、軟骨細胞は脂肪滴を形成しなかった。同様に、骨分化では軟骨膜細胞は多数のCaの沈着を認めアリザリンレッドにて染色されたが、軟骨細胞は染色されなかった。
これらのことより、軟骨膜細胞は「軟骨間葉系前駆細胞」であることが示唆され、今後の軟骨再生にとって重要な意義があると思われた。
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