| 研究課題/領域番号 |
20592137
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
磯田 竜太朗 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 特任研究員 (40456942)
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| 研究分担者 |
川端 重忠 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (50273694)
寺尾 豊 大阪大学, 大学院・歯学研究科, 准教授 (50397717)
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| キーワード | 歯周炎 / 動物モデル / 常在細菌 / 粘膜免疫 / 免疫寛容 / 歯周病原性細菌 |
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| 研究概要 |
Aggregatibacter actinomycetemcomitans(以後Aaとする)は、ヒトの歯周病原性細菌と考えられているが、健常人の口腔内にも存在する常在細菌でもある。本研究では、「外来菌」ではなく、常在菌としての仔マウスの常在細菌形成期に、母および仔マウスを飲料水に懸濁したAa生菌に暴露して、Aaを仔マウスの常在細菌として取り込ませることを試みた。
計画初年度において、仔マウスの口腔内から回収した細菌サンプルをPCR法で解析した結果、Aaがしばしば検出された。さらに、マウスの唾液中および血清中からは、それぞれAa特異的IgA抗体およびIgG抗体が検出された。ところが、計画二年目以降は口腔内細菌叢からAaが検出されなくなった。また、母マウスは唾液IgA、血清IgGともに高いAa特異的抗体価を示すにも関わらず、仔マウスでは両抗体価が検出限界以下に留まるようになった。
以上の経緯を踏まえ、本年度はAa検出PCR法の精度と感度を高めることにした。マウスの唾液中にPCRの阻害物質が存在うることから、PCRのテンプレートとなる口腔内細菌DNAの精製方法について検討を重ねた。その結果、Whatman社のFTA Elute Cardを用いる方法が、精製過程でのDNAの損失を抑えて、効率的に阻害物質を除去できるという結論に至った。しかし、この方法でも仔マウスの口腔内細菌サンプルからはAaが検出されず、Aaの常在菌としての定着が再現されたAa特異的抗体が仔マウスに移行したり、乳汁中に分泌されたりすることにより、Aaの仔マウスへの定着が妨げられたと推察している。
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