| 研究分担者 |
寺田 信行 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (50150339)
中正 恵二 兵庫医科大学, 医学部, 准教授 (00217712)
山田 直子 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (10319858)
山根木 康嗣 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (00434944)
浦出 雅裕 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (70104883)
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| 研究概要 |
本研究は,1)歯周組織に存在し,HLA-II分子を発現する細胞群が,同分子を介した刺激を受けることによって,どのような細胞活性を示すかを明らかにすること,また,2)HLA-II分子を介した刺激を受けたそれらの細胞から産生される液性因子が,樹状細胞およびT細胞の分化に対してどのように影響するかを明らかにすることを目的とする。本年度は,これらのことを評価する上で必要となるアッセイ系を確立すること,またその被験試料の採取を行った。健常者3名から歯肉線維芽細胞(GF)を採取し,細胞株を樹立した。それら細胞株のHLA-II分子のDR分子およびDQ分子の発現をフローサイトメトリーを用いて確認した。また,皮膚線維芽細胞,血管内皮細胞および骨芽細胞の正常細胞株についても,同様にそれらHLA分子の発現を確認した。概して,DR分子の発現に比べて,DQ分子の発現量は低く,DR分子はIFN-γ刺激時において発現量が大きく促進されることに比べて,DQ分子は,IFN-γ刺激の有無にかかわらず,恒常的に発現した。これら細胞株を抗HLA-DR,-DQ抗体で刺激した時の培養上清を上記2)のアッセイを行う際の試料として回収した。
また,さらに上述2)におけるアッセイ系を確立した。すなわち,被験末梢血単核球から分取したCD14陽性細胞にGM-CSFおよびIL-4存在下で培養することによって分化誘導した樹状細胞とHLA-IIハプロタイプが異なる被験末梢血単核球から分取したナイーブT細胞との混合培養を7日問行った。なお樹状細胞は,LPS存在下および非存在下において未熟樹状細胞から成熟樹状細胞へ分化誘導を行った。その後,T細胞のみを回収し,非特異的に刺激した後の培養上清のサイトカイン・プロファイルを調べ,LPS存在下においてTh1サイトカイン優位になっていることを確認し,系が有効であることの論拠を得た。
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