| 研究概要 |
アミロイド誘導反応を実施し、病理学的検索と質量分析学的検索を実施し、我々の「酸化的β脱離によるTTR由来アミロイド原性誘導反応機序」の証明を試みた。
1)TTR標品とアミロイド誘導反応促進剤(Cysteine-S-sulfonate:Cys-S-SO3)を共存し、37℃弱アルカリ性下で反応させ、得られた生成物をMALDITOF-MSにて解析した結果、TTR分子の^<10>Cysの遊離SH基がS-sulfonationし、+80Da増加している事確認した(S-sulfonated TTR:13846.31)。また、同時に、反応生成物をCongo-Red/Thioflavine-Sにて染色し、蛍光顕微鏡下、特異な蛍光を発する凝集体を確認した。
2)ヒト組織切片、マウス組織切片スライド上にCys-S-SO3を滴下し37℃にて反応させ、経時的(0.5、1、2、4及び6時間)に組織内発現タンパク質の構造変化をImagingMSにて解析した。その結果、TTR分子は残念ながら今回、確認出来なかったが、Hba鎖に関して、S-sulfonationを確認し得た。また、その反応は試験管内反応同様、短時間で終了し得る事も確認し得た。
3)アミロイド誘導反応2か月後の組織切片スライドを用いてHematoxylin/Congo-Red染色を試みたがアミロイド凝集は認められなかった。
4)アミロイド斑陽性サンプルとしてヒトアルツハイマー病患者脳前頭葉切片スライドを用いたImagingMS解析にて、アミロイドβ(Ab)1-37,1-38,1-39,1-40,1-42ペプチドを検出し、更にそれ以外のMyelin Basic Protein(MBP)などを検出し、更にその細胞内分布がAbとは全く異なる分布を示す事を明らかにした。
次年度は、酵素標識抗体を使った免疫組織学的検索とImaging解析を進めて行く。
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