レトロウィルス発現系を用いた発癌関連miRNAの探索

2009 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20659151
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 野阪 哲哉 三重大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (30218309)
• キーワード: miRNA / microRNA / レトロウイルスベクター / 発癌 / 造血細胞腫瘍

研究概要

当研究の目的は、遺伝子発現効率の良いレトロウイルス発現系を用いて、主に造血器腫瘍に関与するマウスmicroRNA(miRNA)を同定し、新規の発癌分子機構を明らかにするとともに、新たな治療法の開発に応用することである。この分野は最近急速に脚光を浴びてきており、従来の古典的遺伝子発現だけでは説明がつかなかった現象でも、non coding RNAによる発現調節によって、多角的にがん化機構を捉えることが可能になってきた。
我々はまず、MLL(Mixed Lineage Leukemia)関連白血病のがん化に関連するようなmiRNAの探索から開始した。最初に、4-hydroxytamoxifen(4-HT)の除去によりMLL-ENL(-Estrogen Receptor(ER))の作用を消失させた時に、造血細胞において発現レベルが変化するmiRNAをmicroarrayにて探索した。その結果、miR-XXX(未発表データ)の発現上昇が観察され、real time PCR法にて、確認した。miR-XXX自体はがん抑制遺伝子的に働いている可能性が考えられる。即ち、がん遺伝子的に働く遺伝子の発現を抑える遺伝子である可能性が高い。実際、miR-XXXは白血病細胞の分化に伴って発現が上昇することがすでに報告されている。次に、MLL-ENLでtransformした細胞におけるmiR-XXXの強発現や、造血細胞におけるmiR-XXXのノックダウンの表現型を解析し、その標的遺伝子を明らかにする目的で、効率がよく、特異性の高いsiRNA発現システムの開発を試みた。具体的には、生理的発現に近いU1プロモーターを用いたshRNA発現用のレトロウイルスself-inactivationベクターを構築した。しかし、OFF-targetingなどの欠点は少ないものの、siRNAの発現効果が弱く、U1プロモーターの使用は適さないことが判明した。これに対して、U6プロモーターを用いた同様のベクターは効果が高いことが判明したので、miR-XXXの機能解析を行い、引き続き、他のmiRNAの探索・機能解析も行う予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Cv2, functioning as a pro-BMP factor via twisted gastrulation, is required for early development of nephron precursors (2010)
  • 著者名/発表者名: Ikeya M, Fukushima K, Kawada M, Onishi S, Furuta Y, Yonemura S, Kitamura T, Nosaka T, Sasai Y.
  • 雑誌名: Dev Biol 337 ページ: 405-414
  • 査読あり
• [雑誌論文] FLT3-ITD induces ara-C resistance in myeloid leukemic cells through the repression of the ENT1 expression (2009)
  • 著者名/発表者名: Jin G, Matsushita H, Asai S, Tsukamoto H, Ono R, Nosaka T, Yahata T, Takahashi S, Miyachi H.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 390 ページ: 1001-1006
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mixed-lineage-leukemia (MLL) fusion protein collaborates with Ras to induce acute leukemia through aberrant Hoxexpression and Raf activation (2009)
  • 著者名/発表者名: Ono R, Kumagai H, Nakajima H, Hishiya A, Taki T, Horikawa K, Takatsu K, Satoh T, Hayashi Y, Kitamura T, Nosaka T.
  • 雑誌名: Leukemia 23 ページ: 2197-2209
  • 査読あり
• [雑誌論文] Possible involvement of RasGRP4 in leukemogenesis (2009)
  • 著者名/発表者名: Watanabe-Okochi N, Oki T, Komeno Y, Kato N, Yuji K, Ono R, Harada Y, Harada H, Hayashi Y, Nakajima H, Nosaka T, Kitaura J, Kitamura T.
  • 雑誌名: Int J Hematol 89 ページ: 470-481
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Rac GTPase activating protein MgcRacGAP is an NLS-containing nuclear chaperone in the activation of STAT transcription factors (2009)
  • 著者名/発表者名: Kawashima T, Bao YC, Minoshima Y, Nomura Y, Hatori T, Hori T, Fukagawa T, Fukada T, Takahashi N, Nosaka T, Inoue M, Sato T, Kukimoto-Niino M, Shirouzu, M, Yokoyama S, Kitamura T.
  • 雑誌名: Mol Cell Biol 29 ページ: 1796-1813
  • 査読あり
• [学会発表] ヒトパラインフルエンザ2型ウイルス (hPIV2) P蛋白上の核移行シグナル (NLS) と核外移行シグナル (NES) の同定 (2009)
  • 著者名/発表者名: 西尾真智子, 大塚順平, 鶴留雅人, 野阪哲哉
  • 学会等名: 第57回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2009-10-27
• [学会発表] パラインフルエンザ2型ウイルスベクターを用いたアトピー性疾患に対する遺伝子免疫療法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 北川敬之, 坂口直, 仁儀明納, 西村廣明, 伊奈田宏康, 駒田洋, 鶴留雅人, 野阪哲哉, 保富康宏, 河野光雄
  • 学会等名: 第57回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2009-10-26
• [学会発表] MLL-ENL融合遺伝子は造血幹細胞のみを標的として形質転換を生じる (2009)
  • 著者名/発表者名: 小埜良一, 桝屋正浩, 宮田恵里, 中島秀明, 上迫努, 伊藤守, 鈴木圭, 片山直之, 北村俊雄, 野阪哲哉
  • 学会等名: 第71回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2009-10-24
• [学会発表] Malignant transformation by MLL-ENL fusion gene arises selectively from long-term hematopoietic stem cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Ono R, Masuya M, Miyata E, Nakajima H, Kamisako T, Ito M, Suzuki K, Katayama N, Kitamura T, Nosaka T.
  • 学会等名: 第68回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2009-10-01
• [備考]
  • URL: http://www.medic.mie-u.ac.jp/microbiol/