| 研究概要 |
ヒストンH3をコードする3つの遺伝子それぞれにGFP標識し、GFP抗体を用いたクロマチン免疫沈降解析を行いました。セントロメア領域およびヘテロクロマチン領域への各ヒストンH3の結合様式を調べましたが、3つのヒストンH3の間に大きな違いは認められませんでした。3つのヒストンH3の修飾の違いについて、メチル化、アセチル化、リン酸化を認識する抗体を使用してウェスタンブロットにより解析しました。わずかな違いが検出されたので、細胞周期を同調させた細胞で同様の解析を行いました。しかし、ウェスタンブロットのシグナルが弱く、3つの間の違いについて明確に結論づけることができませんでした。
昨年度、ヒストン遺伝子を恒常的に高発現させると細胞が致死になることを見出しました。本年度はその現象の原因解明を行いました。ヒストン転写をつかさどるAms2自身がS期限定発現しており、修飾を受けて分解されることが観察されました。そこで、その修飾を調べたところリン酸化とユビキチン化であることが分かりました。S期キナーゼであるDDKによりAms2がリン酸化されることをin vitro,in vivoで明らかにしました。また、Ams2をユビキチン化する酵素がSCF^<Pof3>であることを示し、ユビキチン化されたAms2はプロテアソームによって分解されることを明らかにしました。これら一連のAms2分解反応がS・G2期に行われることが、S期特異的Ams2の存在を規定しているだけでなく、ヒストン発現をS期に限定している機構であることが分かりました。この機構が破綻し、S期以外にもヒストンの転写が行われると、染色体の特にセントロメア領域のヌクレオソーム構造が異常となり、細胞が致死になることを明らかにしました。この研究結果をDevelopmental Cellに発表しました。
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