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維管束分化の転写制御ネットワークを明らかにするために、昨年度は各転写因子を過剰発現させることのできるベクタープールを作製した。今年度は、この転写因子ベクタープールを用いていくつかの転写因子の上流にある制御因子の単離を2つの方法で試みた。1つ目の方法として、Nicotiana benthamianaの葉にベクタープールとスクリーニング対象遺伝子のプロモーターレポーターを同時にインジェクションする方法でスクリーニングを行った。その結果、木部道管分化に関わるbHLH遺伝子の上流制御候補因子を単離することができた。2つ目の方法として道管分化のマスター因子であるVND7の制御因子の探索を、VND7プロモーターレポーターをもつシロイヌナズナ個体に転写因子過剰発現プールを形質転換する方法で行った。VND7レポーターを異所的に発現させる転写因子をスクリーニングした結果、LBD/ASLファミリー遺伝子を得た。8つのLBD/ASLファミリー遺伝子の詳細な発現解析を行った結果、一つのLBD/ASL遺伝子がVND7と発現領域が重なっており、VND7の制御因子であることがわかった。このLBD/ASLはVND7プロモーターのあるシス領域に直接結合することがわかった。また、VND7はこのLBD/ASLの転写を正に制御していることも明らかとなった。以上の結果から、このLBD/ASLはVND7と正のフィードバックループを形成しVND7の発現を増幅する機能を持つことが示唆された。また、今年度の結果より、今回作成した転写因子を過剰発現させるプールを用いたスクリーニング方法が転写ネットワークを明らかにするためのツールとして有効であることが明らかになった。
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