| 研究概要 |
大腸菌の分裂位置を制御するMinタンパク質(MinC,D,E)によるFtsZ(分裂環)の重合反応の制御機構について解析を行い以下の知見を得た。昨年度まで、MinCとFtsZの相互作用を蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)として溶液内で観測に成功していた。本年度は、MinCとFtsZ間の相互作用の測定精度を向上し、定量的に評価した。それら解析の結果、MinCは重合したFtsZ繊維よりも、むしろモノマーのFtsZと相互作用し、可逆的に行われる事が明確となった。さらにFtsZの重合反応反応のFRETによるリアルタイム観測にも成功した。これら解析結果から、Minシステムによる分裂環の形成制御において、FtsZモノマーとMinCとの相互作用に注目し解析する事が重要である事が分かった。また、Minタンバク質のホモログと考えられるNubpタンパク質(Nubp1,2)のヒト培養細胞を用いて細胞内局在解析を行い、細胞内に2種類存在するNnbp1とNubp2の細胞内局在の違いを明らかにし、さらにNubpが多核化に関与する事を見いだとた。
一方、ガラスおよびマイカ基盤表面に脂質膜を作製する実験に関しても大きな進歩が得られた。昨年度までは、基盤上に数百nm～1μm程度の平面膜を作製したが、平面膜のサイズがさい問題が生じていた。溶液内に2価カチオンを加えることで、脂質膜の融合を促進し、その結果、基盤上の平面脂質膜も数百μmサイズにまで大きく広がる条件を見いだした。基盤上の平面脂質のサイズは、タンパク質解析に十分な面積を確保に成功した。FREPによる脂質の側方拡散定数の測定にも成功し、基盤上の脂質の物性を明らかにした。
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