In vitroプリオン増殖機構解析:PrP遺伝子欠損細胞を用いた改良PMCA法

2008 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20780219
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 作道 章一 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (10397672)
• キーワード: 微生物 / 獣医学 / 感染症 / ウイルス / 神経科学 / プリオン / 人畜共通感染症

研究概要

本研究は、プリオン蛋白質(PrP)遺伝子欠損マウス神経細胞株に欠損変異マウスPrP遺伝子もしくは異種PrP(ハムスター、ウシ)を導入した細胞のライゼートを正常型PrP(PrPC)供給源として、マウススクレイピープリオンもしくは異種プリオン(それぞれハムスタースクレイピープリオン、Bovine spongiform encephalopathy (BSE)プリオン)存在下でprotein misfolding cyclic amplification(PMCA)を行い、異常型PrP(PrPSc)増幅の有無からPrPSc増幅に必要なPrPC領域の同定および異種PrPScの増幅をおこなうことを最終目的とする。本年度は、PrP遺伝子欠損マウス神経細胞株に欠損変異マウスPrP遺伝子欠損変異PrP遺伝子(PrPΔ#1, PrPΔ#2, PrPΔ#3)を導入した細胞、ハムスターPrP遺伝子を導入した細胞、ウシPrP遺伝子を導入した細胞を樹立した。さらに、これらの樹立した細胞より細胞ライゼートを調整し、抗PrP抗体を用いたウエスタンブロッティングによるPrPの検出を行った。その結果、PMCAに利用するに十分な量のPrPC供給が可能なPrP発現細胞の樹立と細胞ライゼートの調整ができていることがわかった。加えて、異種および同種PrP遺伝子発現細胞のアポトーシス感受性を血清除去誘導アポトーシスにより比較したところ、同種(マウス)PrPの場合のみPrPがアポトーシス抑制に働き、ハムスターやウシPrPにはアポトーシス抑制効果が見られないことが明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] Quantification of PrPC in bovine peripheral tissues : analysis in wild-type and PrPC-deficient cattle (2009)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi S, Ano Y, Sakudo A, Yukawa M, Sugiura K, Manabe N, Nakayama H, Onodera T.
  • 雑誌名: Mol Med Rep (印刷中)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Role of cellular prion proteins in the function of macrophages and dendritic cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Nitta K, Sakudo A, Masuyama J, Xue G, Sugiura K, Onodera T.
  • 雑誌名: Protein Peptide Lett (印刷中)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Uptake and dynamics of infectious prion protein in the intestine (2009)
  • 著者名/発表者名: Ano Y, Sakudo A, Nakayama H, Onodera T.
  • 雑誌名: Protein Peptide Lett (印刷中)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fundamentals of prion diseases and their involvement in the loss of function of cellular prion protein (2009)
  • 著者名/発表者名: Sakudo A, Ikuta K
  • 雑誌名: Protein Peptide Lett (印刷中)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intestinal uptake of amyloid β protein through columnar epithelium cells in suckling mice (2009)
  • 著者名/発表者名: Ano Y, Nakayama H, Sakudo A, Sawano Y, Tanokura M, Itohara S, Onodera T
  • 雑誌名: Histol Histopathol 24 ページ: 283-292
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prion protein functions and dysfunction in prion diseases (2009)
  • 著者名/発表者名: Sakudo A, Ikuta K
  • 雑誌名: Curr Med Chem 16 ページ: 380-389
  • 査読あり
• [雑誌論文] Octapeptide repeat region of prion protein (PrP) is required at an early stage for production of abnormal prion protein in PrP-deficient neuronal cell line (2008)
  • 著者名/発表者名: Sakudo A, Wu G, Onodera T, Ikuta K
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 365 ページ: 164-169
• [雑誌論文] Cellular prion protein prevents brain damage after encephalomyocarditis virus infection in mice (2008)
  • 著者名/発表者名: Nasu-Nishimura Y, Taniuchi Y, Nishimura T, Sakudo A, Nakajima K, Ano Y, Sugiura K, Sakaguchi S, Itohara S, Onodera T
  • 雑誌名: Arch Virol 153 ページ: 1007-1012
• [雑誌論文] PrPSc level and incubation time in a transgenic mouse model expressing Borna disease virus phosphoprotein after intracerebral prion infection (2008)
  • 著者名/発表者名: Sakudo A, Onodera T, Ikuta K
  • 雑誌名: Neurosci Lett 431 ページ: 81-85
• [雑誌論文] Establishment of a new glial cell line from hippocampus of prion protein gene-deficient mice (2008)
  • 著者名/発表者名: Nishimura T, Sakudo A, Xue G, Ikuta K, Yukawa M, Sugiura K, Onodera T
  • 雑誌名: Riochem Bionhys Res Commun 377 ページ: 1047-1050
  • 査読あり
• [雑誌論文] Species-specific anti-apoptotic activity of cellular prion protein in a mouse PrP-deficient neuronal cell line transfected with mouse, hamster, and bovine Prnp (2008)
  • 著者名/発表者名: Wu G, Nakajima K, Takeyama N, Yukawa M, Taniuchi Y, Sakudo A, Onodera T
  • 雑誌名: Neurosci Lett 446 ページ: 11-15
  • 査読あり
• [雑誌論文] Incorporation of beta-amyloid protein through the bovine ileal epithelium before and after weaning : model for orally transmitted amyloidoses (2008)
  • 著者名/発表者名: Ano Y, Nakayama H, Sakai Y, Sakudo A, Endo M, Ebisu S, Li J, Uetsuka K, Manabe N. Onodera T
  • 雑誌名: Microbiol Immunol 52 ページ: 429-434
  • 査読あり
• [雑誌論文] Coordinate regulation of bovine prion protein gene promoter activity by two Sp1 binding site polymorphisms (2008)
  • 著者名/発表者名: Xue G, Sakudo A, Kim CK, Onodera T.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 372 ページ: 530-535
  • 査読あり
• [雑誌論文] Distinct immunohistochemieal localization in Kuru plaques using novel anti-prion protein antibodies (2008)
  • 著者名/発表者名: Hosokawa T, Ono F, Tsuchiya K, Sato I, Takeyama N, Ueda S, Zanusso G, Takahashi H, Sata T, Sakudo A, Suguira K, Baj A, Toniolo A ; Yoshikawa Y, Oondera
  • 雑誌名: Microbiol Immunol 52 ページ: 25-29
  • 査読あり
• [雑誌論文] Normal cytochrome c oxidase activity in prion proteingene-deficient mice (2008)
  • 著者名/発表者名: Sakudo A ; Taniuchi Y, Kobayashi T, Onodera T, Ikuta K
  • 雑誌名: Protein Peptide Lett 15 ページ: 250-254
  • 査読あり
• [雑誌論文] GPI-anchor-less human prion protein is secreted and glycosylated but lacks SOD activity (2008)
  • 著者名/発表者名: Sakudo A, Nakamura I, Isuji S, Ikuta K
  • 雑誌名: Int J Mol Med 21 ページ: 217-222
  • 査読あり
• [雑誌論文] A monoclonal antibody (1D12) defines novel distribution patterns of prion protein (PrP) as granules in nucleus (2008)
  • 著者名/発表者名: Hosokawa T, Tsuchiya K, Sato I, Takeyama N, Ueda S, Tagawa Y, Kimura KM, Nakamura I, Wu G, Sakudo A, Casalone C, Mazza M, Caramelli M, Takahashi H, Sata T, Sugiura K, Baj A, Toniolo A, Onodera T
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 366 ページ: 657-663
  • 査読あり
• [学会発表] スクレーピー感染マウス脳における酸化ストレス障害 (2009)
  • 著者名/発表者名: 阿野泰久, 作道章一, 梶村佳史, 生田和良, 小野寺節
  • 学会等名: 第147回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 栃木
  • 年月日: 20090402-20090404
• [学会発表] Uptake of amyloid protein in the murine and bovine intestines before and after weaning : a model for the enteric invasion of infectious prion protein (2008)
  • 著者名/発表者名: Ano Y, Nakayama H, Sato Y, Sakudo A, Manabe N, Yukawa M, Onodera T
  • 学会等名: Prion 2008
  • 発表場所: Madrid
  • 年月日: 20081008-10
• [学会発表] 可視・近赤外分光法によるマウススクレーピー感染病態解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 作道章一, 阿野泰久, 小林孝徳, 小野寺節, 生田和良
  • 学会等名: 第146回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 宮崎
  • 年月日: 20080924-20080926
• [学会発表] DNA damage through oxidative stresses in the prion-infected mouse brain (2008)
  • 著者名/発表者名: Ano Y, Sakudo A, He XJ, Sato Y, Yukawa M, Ikuta K, Yokoyama T, Nakayama H, Onodera T
  • 学会等名: The 14th International Congress of Virology
  • 発表場所: Istanbul. Turkey
  • 年月日: 20080810-15
• [図書] Molecular detection of Foodborne pathogens (Edited by Liu D)Chapter 43 : Slow viral disease (eg, prions)
  • 著者名/発表者名: Onodera T, Sakudo A, Sugiura K
  • 出版者: Taylor and Francis Group(印刷中)