| 研究概要 |
本研究は,ヒト間葉系幹細胞(hMSC)の糖鎖を指標とした神経分化能評価技術を開発することを目的としている.平成20年度は,hMSCの細胞特性を明らかにすることを目的として,^<13>Cで同位体標識したフェニルヒドラジン(PHN)を標識試薬として用いる糖鎖ラベル化法と液体クロマトグラフィー/多段階質量分析(LC/MS^n)を組み合わせた定量的糖鎖プロファイリング法により,培養条件の異なるhMSCの糖鎖プロファイルの比較定量解析を行った.ウシ胎仔血清(FCS)添加培地及び無血清培地で培養した細胞の糖鎖をそれぞれ^<12>C-PHN及び^<13>C-PHNで標識して,細胞数当り等量となるように混合した試料をナノフローLC/MSにより分析した.フーリエ変換質量分析及びMS^nにより得られた精密質量とフラグメントパターンの解析により,hMSCの主要N結合型糖鎖は,高マンノース型,パウチマンノース型,及び複合型糖鎖であることが明らかとなった.また無血清培地及びFCS添加培地で培養した細胞の糖鎖を比較定量解析した結果,無血清添加培地で培養した細胞では,フコシル糖鎖が顕著に増加することが明らかとなった.これらの結果から,本分析法は細胞特性解析法として有用であることが実証されると共に,フコシル糖鎖はhMSCの同等性評価指標として利用できる可能性が示唆された.今後本分析法により, MSC神経分化関連糖タンパク質の一つであるチロシンリン酸化キナーゼA (TrkA)の分化前後の糖鎖プロファイルを明らかにして,神経分化と糖鎖構造変化の関係について検討する予定である.
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