| 研究概要 |
nuclear envelopeを用いた研究の途上、マウス膵臓腺房細胞に存在するCa^<2+>依存性の電位依存性K^+チャネル(maxiK/BK)の、小胞体膜中における向き(配向)が、通常考えられているものと逆(通常は細胞質中に細胞内領域を持つ向きに入っているが、我々の系では、細胞質側に細胞外領域を向けている)であることを見出した(Maruyamaら、2003,2005)。この現象は、今までの知見とは一致しない、非常に興味深いものである。例外的とも言える小胞体膜中のmaxiKチャネルの配向には、生理的に何らかの意味があるものと考えられる。本研究では、その技術を用いて小胞体膜中に埋め込まれたCa^<2+>依存性の電位依存性K^+チャネル(maxiK/BK)が、小胞体で果たす生理的役割についての研究を行うものである。
本年度は、現在までに得られている電気生理学的実験による、maxiKチャネルの配向を、組織学的な手法により確認する実験を行った。小胞体膜に発現し、小胞体のマーカーとして用いられる、calnexinに対する抗体を用いて、nuclear envelopeで免疫染色を行い、我々が用いているnucleur envelope標本におけるER膜が,intactな膜の配向を維持している事を確認した。
その後、通常と逆の配向を示す膵臓腺房細胞に発現するmaxiKチャネル遺伝子のクローニングを行うために、その前段階として、5'RACE法により、遺伝子の5'末端配列の同定を行うとともに、RT-PCR法により、3'末端配列の同定も行った。これらの結果をもとに、現在、膵臓腺房細胞に発現するmaxiKチャネル遺伝子のクローニングにとりくんでいる。今後は、このクローンが通常と逆の配向を示す機構の解明を目指す予定である。
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