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(1)卵子の加齢変化
加齢に伴う卵細胞核のエピゲノム状態変化のスクリーニングを行った。11ヶ所のインプリンティング遺伝子のDMR(differentiated methylated resion)、2ヶ所の反復配列について加齢マウス(43週齢±3週)と若年マウス(8適齢±2週)の卵子ゲノムを用いてbisulfite sequenceおよびCOBRA解析を行った. 加齢マウスで低メチル化になる領域を同定し、その確認作業・生殖能力における影響について検討に入ったところである. 加齢における妊孕性低下とエピジェネティクスについて一つの新しい知見となる.
老化卵子におけるmiRNA量変化の解析を行った。加齢マウスと若年マウスの卵子のtotal RNAを用い、micro-arrayによる解析を行った。発現量の変化について、real-time PCR法にて確認、検討作業を行った。miRNAが胚発生に必須であることは分かっているが、具体的な役割については不明である。加齢変化と合わせ、Sanger instituteのデータベースを参考に、レトロトランスポゾンの発現やDNAメチル化、卵子の貯蔵mRNAの翻訳に関わると予想されるmiRNAについて更なる検討を加えている.
(2)胎盤形成とsmall RNA
未分化な胚体外組練を反映している栄養膜幹細胞(TS細胞)よりsmall RNAを抽出、濃縮し、リンカーをつけたsmall RNAをベクターに導入し、TS細胞発現small RNAライブラリーを作成し、sequenceを行い、網羅的に配列を同定した. そのうえでsmall RNAの働きを検討するため、卵子や精子などのライブラリーを参考に、クラスター解析を行っている。他のデータベースと比較・検討し、特殊な臓器である胎盤発生でのsmall RNAの働きについて明らかにする. また未知のmiRNAを同定しており、今後さらなる検討を行う予定である。エピジェネティクス
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