| 研究概要 |
我々は当該研究において、初代肝幹細胞を分離・培養し、これに対して目的分子の発現を修飾することで肝幹/前駆細胞の増殖制御に関わる分子機構について解明を試みつつ、肝幹/前駆細胞の増殖活性を亢進・制御した細胞を肝障害マウスに移植し、致死的肝不全を治療しうる動物モデルの構築を目指す研究を行い、今年度の成果として下記を得た。(1).マウス肝幹・前駆細胞の分離、培養と遺伝子導入/siRNA系を用いた目的遺伝子の肝幹細胞増殖に対する機能のスクリーニング:マウス胎仔肝臓から初代肝幹/前駆細胞が高濃度に純化された画分を分取し、増殖もしくは肝細胞への分化を誘導する培養実験系を確立した。この中で、CD13をマーカーとして分取するとより濃縮した画分が得られることを発見した(Journal of Hepatology, 2009)。さらに肝幹・前駆細胞に対して、分化・増殖に関与することを予想している遣伝子の強制発現およびノックダウンを行った。その結果、転写因子Sall4は肝幹・前駆細胞の胆管細胞への分化を正に調節していることを示した(Oikawa et al.Gastroenterology, 2009)。(2).肝幹細胞を用いた細胞移植系の開発と移植後の細胞動態の解析:研究代表者は成体由来肝細胞を用いて、高度の肝キメリズムが得られる移植系を確立した。高脂血症を呈するApoE欠損マウスに対して野生型肝幹・前駆細胞を移植したところ、高脂血症が治癒し、移植した細胞がレシピエント肝で1年以上にわたって肝細胞として機能することを示した(第95回日本消化器病学会総会にて発表)。さらに、成体マウス月刊蔵から分離した肝幹・前駆細胞についても検討し、移植細胞が長期間肝臓を再構築できることを示した(Kamiya et al.Gastroenterology, 2009)。(3).肝幹細胞とマトリックス担体を用いた肝小葉類似組織構築系の開発:肝幹・前駆細胞をマトリジェルと共に培養することによって、試験管内で肝細胞への誘導が促進され、類洞様の構築をとることを示した。このように、本研究計画は目標を概ね達成できたが、致死的肝疾患治療モデル構築に関しては、今後もさらなる検討が必要であると考えられる。
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