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1. ランゲルハンス細胞、真皮樹状細胞の培養
市販の臍帯血由来CD34陽性細胞を用い、無血清培地X-VIVOI5にM-CSF、TNF-a、Flt-3 ligand、stem cell factor、TGF-β1を添加した培養系でランゲルハンス細胞とほぼ同様のphenotypeを有する細胞を分化誘導した。健常人ボランティア由来の末梢血単球をGM-CSF、IL-4添加培地で培養し単球由来樹状細胞を誘導した。
2. ランゲルハンス細胞、真皮梅状細胞の網羅的遺伝子解析
上記の方法により分化誘導したランゲルハンス細胞、真皮樹状細胞よりRNAを回収して、網羅的遺伝子解析を行った。Agilent社製マイクロアレイシステムにて発現強度のパターンからランゲルハンス細胞と真皮樹状細胞との間で発現強度に違いのある遺伝子を同定した。ランゲルハンス細胞でのみ高発現していることが定説となっている遺伝子(Langerrin、S100、E cadherin等)は、我々の結果でも真皮樹状細胞ではみられず、妥当と考えた。
3. ランゲルハンス細胞、真皮樹状細胞で発現の異なった遺伝子のreal-time PCRを行ってマイグロアレイの結果を確認し、従来知られていなかった複数の遺伝子を同定し、新治験を得た。
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