| 研究概要 |
本年度は主にUb-Mesothelin融合遺伝子導入DCによるMesothelin特異的CTLの細胞傷害活性の増強効果についての検討を行った.
1.Ub-Mesothelin融合遺伝子発現Adenovirus vector (AxCAUbhMSLN)の作製
Ub遺伝子を健常人PBMCからgenomic DNAを抽出し,以下のprimerを用いたPCRで76アミノ酸Ubmonomerを増幅し、TAクローニングした。sense 5'-AGT CCG CTA GCC GCC ACC ATG CAG ATC TTC GTG AAG ACC-3'、antisense 5'-TAG TCC GTC GAC GTA TTT AAA TCG ACC CCC CCT CAA GCG CAG GAC-3'TAクローニングベクター(pCR^<[○!R]>,Invitrogen)上でUbシークエンスを確認した後、Ub fragmentをpAxCAwtに導入し、pAxCAUbを作製した。そして、あらかじめUb 3'primer内に設置したSwa I siteを利用してUbの下流にMesothelin cDNAをligation後、COS-TPC法にてAxCAUbMSLNを作製した。
2.Flow cytometryによるDC-AxCAUbMSLNにおけるMesothelinの発現解析
3.Ub-Mesothelin融合遺伝子導入DCによるCTL誘導,さらにIFN-γ ELISAによるCTL活性を測定した.上記にて作業仮説どおりUb-Mesothelin融合遺伝子導入DCはMesothelin遺伝子単独導入DCより強いCTLが得られることを立証した.本研究の前半部分をまとめて論文とし発表した.Cancer Letters 305 ; 32-9, 2011
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