| 研究概要 |
口腔癌細胞株を10%fetal bovine serum, 1%penicillin, streptomycin, neomycin添加RPMI1640で培養した。細胞濃度が80%confluentに達した時点でブチル酪酸(SB)を0, 1, 3mMの濃度で添加した。SB添加後、0.5, 1, 3, 6, 12, 24時間後にtotal RNAを抽出し実験に供した。cDNA発現の網羅的解析のために、SB添加6, 12時間後のtotal RNAをcDNA microarray法に供し遺伝子発現プロファイルを検索した。リンパ管誘導因子であるvascular endothelial growth factor(VEGF)-C、angiopoietin2(ANGPT2)、platelet derived growth factor B(PDGF-B)と血管誘導因子であるVEGF、VEGF-Dに着目し、Syberg reen Iを用いたRealtime PCR法によりこれら遺伝子のmessenger RNA量を相対定量し、SB添加による口腔癌細胞株の遺伝子発現の変化を検討した。
cDNA microarray法による解析では、発現の上昇が見られた遺伝子は3727〜4669種、発現低下が見られた遺伝子は1097〜2024種であった。これらの遺伝子の中から、リンパ管および血管誘導因子に着目しrealtime PCRを行った所、SB添加群はリンパ管誘導因子であるVEGF-C発現の著明な低下を認めた。リンパ管誘導因子であるANGPT2、PDGFBと、血管誘導因子であるVEGF、VEGF-Dは発現に有意さを認めなかった。
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