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昨年度までに、口臭の主な原因である硫化水素は口腔内、特に舌苔中のVeillonella属およびActinomyces属によりよく産生され、かつそれらはシステインやシステイン含有ペプチドをよく分解し硫化水素を産生することを報告してきた。
そこで本年度は、これらの細菌によるシステインの代謝経路を推定するために、代謝産物の定量分析方法の確立を行った。従来の硫化物の測定に加え、アンモニア、有機酸および代謝中間体の定量分析を試みた。アンモニアの測定には既存のポータブル測定器を用い、有機酸は既存の液体クロマトグラフや、同じく既存のキャピラリー電気泳動装置と飛行時間測定型質量分析計を組み合わせた装置(CE-TOFMS)を用いた。なお、CE-TOFMSはイオン性低分子化合物の同定・分析に優れた機械であり、代謝産物及び代謝中間体の分析に適している。また少量のサンプルより、網羅的な同定・定量分析が可能なことから、本装置を用いての測定手法の確立を試みた。
現在、測定手法はほぼ確立し、Veillonellaを用いた実際の測定を進めているところであるが、システインを分解し、アンモニアやその他の代謝中間体が産生される様子が観察されつつある。また、同時に菌体より取り出した粗酵素抽出液を用いた酵素活性の測定を行い、既知の阻害剤などを添加することで関連代謝酵素の特定も試みているところである。当該研究の目的である環境因子の影響についても本手法を用いて検討を始めており、多菌種間の相互作用とあわせて、今後さらに検討していきたい。
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