| 研究概要 |
我々はPfetinタンパク質がGISTの有能な予後予測マーカーであることを発見している(Clin Cancer Res2008)。しかし、Pfetinタンパク質の機能については未だ不明である。我々の研究過程において、二次元電気泳動上のpfetinは複数のタンパク質スポットより構成され、各スポットの予後予測精度に大きな差を確認している。その精度の違いは、リン酸化などの翻訳後修飾が関係していることを推測している。その翻訳後修飾やPfetin関連タンパク質の解明は、GISTにおけるPfetinの腫瘍マーカーとしての精度向上や機能解明につながると考えられ、臨床上重要な研究である。1.<翻訳後修飾の解明>今年度はGIST凍結検体よりタンパク質抽出し、我々の作成したpfetin特異抗体と各種リン酸化抗体にて2D-ウエスタンブロットを行い、Pfetinタンパク質スポットのリン酸化のマッピングに成功した。次年度は、質量分析計にてタンパク質構造解析を行い、さらなる翻訳後修飾について詳細に解析する。2.<Pfetin関連タンパク質の同定>今年度はGIST凍結検体とcelllineよりタンパク質を抽出し、Pfetin特異抗体を用い免疫沈降を行った。我々はPfetinタンパク質と共免疫沈降されるPfetin関連タンパ質の確認に成功した。同時にPfetinタンパク質強制発現cell line作成も現在進め、同検体の免疫沈降も予定している。次年度は共免疫沈降したPfetin関連タンパク質を質量分析計にてタンパク質同定を行う。また、その同定されたPfetin関連タンパク質については、特異抗体を用いたウエスタンブロット・免疫染色による腫瘍マーカーとしての能力の検証を行う。3.<付随研究>GIST発生部位・滑膜肉腫組織亜型のタンパク質発現解析を行い、それぞれ論文発表を行った(各Proteomics ClinAppl, 2009inpress)。
|
