マウス造血幹細胞体外増幅系を用いた幹細胞性・加齢・発癌機構の解析

2020 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20H00538
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 中内 啓光 東京大学, 医科学研究所, 特任教授 (40175485)
• 研究分担者: 水野 直彬 東京大学, 医科学研究所, 特任研究員 (30815642)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: 造血幹細胞 / 体外増幅 / 加齢 / クローン性造血 / 発癌 / 遺伝子ノックアウトスクリーニング / マルチオミックス解析

研究実績の概要

成体マウスより採取したマウス造血幹細胞を体外増幅し、表面抗原に対する抗体パネルにより多重染色を行い、イムノフェノタイプ別に体外増幅培養を行い、同種造血幹細胞移植を実施し、幹細胞および各種前駆細胞の機能的分画を評価した。現在、これらのサンプルのRNA-seqを実施中である。
加齢・発癌機構の解析に関しては、Dnmt3a、Tet2、Asxl1などの変異型マウスのコロニーを導入予定であったが、COVID19の影響で供給依頼先の研究活動が一時停止したため、延期となった。野生型マウス造血幹細胞への候補遺伝子破壊実験を行い、期待通り、ex vivoでもクローン性造血などの表現型が得られることを確認し、現在全ゲノム解析・エピゲノム解析などを実施中である。
また遺伝子ノックアウトスクリーニングに関しては、現在、機能群別のgRNAライブラリをウイルスベクター化し、マウス造血幹細胞移植実験を実施中である。

現在までの達成度 (段落)

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Stabilizing hematopoietic stem cells in vitro. (2020)
  • 著者名/発表者名: Wilkinson AC, Nakauchi H.
  • 雑誌名: Curr Opin Genet Dev. 巻: 64 ページ: 1-5
  • DOI: 10.1016/j.gde.2020.05.035.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Diamond Blackfan anemia is mediated by hyperactive Nemo-like kinase. (2020)
  • 著者名/発表者名: Wilkes MC, Siva K, Chen J, Varetti G, Youn MY, Chae H, Ek F, Olsson R, Lundback T, Dever DP, Nishimura T, Narla A, Glader B, Nakauchi H,
  • 雑誌名: Nat Commun. 巻: 11 ページ: 3344
  • DOI: 10.1038/s41467-020-17100-z.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] In vivo and ex vivo haematopoietic stem cell expansion. (2020)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto R, Wilkinson AC, Nakauchi H.
  • 雑誌名: Curr Opin Hematol. 巻: 27 ページ: 273-278
  • DOI: 0.1097/MOH.0000000000000593.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo. (2020)
  • 著者名/発表者名: Wilkinson AC, Igarashi KJ, Nakauchi H.
  • 雑誌名: Nat Rev Genet. 巻: 21 ページ: 541-554
  • DOI: 10.1038/s41576-020-0241-0.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] In vivo clonal analysis of aging hematopoietic stem cells.Mech Ageing Dev. (2020)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto R, Nakauchi H.
  • 雑誌名: Mech Ageing Dev. 巻: 192 ページ: 111378
  • DOI: 10.1016/j.mad.2020.111378.
  • 査読あり / 国際共著