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2022 年度 実績報告書

細胞群から極少数の標的B細胞のハイブリドーマを作製し選択的に回収する手法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 20H02771
研究機関兵庫県立大学

研究代表者

安川 智之  兵庫県立大学, 理学研究科, 教授 (40361167)

研究分担者 鈴木 雅登  兵庫県立大学, 理学研究科, 准教授 (60574796)
研究期間 (年度) 2020-04-01 – 2023-03-31
キーワード誘電泳動 / 細胞アレイ / ハイブリドーマ / 細胞融合 / 選択回収
研究実績の概要

「迅速で高精度な標的抗体産生B細胞の選択的な細胞アレイ化」では,微粒子による細胞標識と誘電泳動を組み合わせて,非標識の標的細胞を選択的にアレイ化する方法を開発した.細胞群にp-DEPが,微粒子にn-DEPが作用する周波数の交流電圧を印加し,微粒子の結合していない標的細胞をp-DEPによりマイクロウェル内に捕捉し,複合体を形成した非標的細胞を下流へ排除した.この方法を用いて,マウス脾臓より単離した細胞群中に約数%~30%程度含まれるB細胞のみを選択的にアレイ化できた.この方法を用いると,標的細胞を含む細胞群のみのアレイを作製することができ,有用細胞のファーストスクリーニングが可能になった.
「標的抗体産生B細胞のハイスループットな識別」では,免疫化マウスの脾臓から摘出した細胞群をアレイ化し,そのB細胞が分泌する抗体をウェルに固定化した抗原により捕捉して抗体分泌能を評価した.これまでは,別の方法で作製したハイブリドーマを対象とした抗体産生の評価を行ってきたが,これをマウスから摘出したB細胞のスクリーニングに応用展開することができた.
「異種細胞ペアアレイの形成と融合」では,長方形型のマイクロウェルアレイ電極にミエローマ細胞とB細胞のペア形成を行い,ウェル内に非対称な電場を与えて細胞ペアの融合を行った.左右非対称電場を用いることにより直径の大きいミエローマ細胞の破砕を抑制して異種細胞を融合することができた.さらに,ウェル底面に多孔質絶縁膜(PDMSエマルジョン)の薄膜形成により,細胞と電極エッジ間距離を制御し,細胞を局所的高電場にさらすことによる破砕を抑制できた.
「捕捉されたポジティブ細胞の選択回収」では,標的の抗体を産生するB細胞を負の誘電泳動を用いて選択的に回収する,不要細胞を排除しウェル内に抗体分泌細胞のみをウェル内に保持することを実現した.

現在までの達成度 (段落)

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (27件)

すべて 2023 2022 その他

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件) 学会発表 (21件) (うち国際学会 3件、 招待講演 1件) 備考 (1件) 産業財産権 (1件)

  • [雑誌論文] Development of a simultaneous electrorotation device with microwells for monitoring the rotation rates of multiple single cells upon chemical stimulation2023

    • 著者名/発表者名
      Masato Suzuki, Shikiho Kawai, Chean Fei Shee, Ryoga Yamada, Seiichi Uchida, Tomoyuki Yasukawa
    • 雑誌名

      Lab on a chip

      巻: 23 ページ: 692-701

    • DOI

      10.1039/d2lc00627h

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Influence of Chlorine Oxyacid on the Electrooxidation of Methanol in Strong Acid2022

    • 著者名/発表者名
      Fumihiro Kodera, Shun Sato, Fumie Saito, Tomoyuki Yasukawa, Minoru Umeda
    • 雑誌名

      Chemistry Letters

      巻: 51 ページ: 666-668

    • DOI

      10.1246/cl.220098

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Selective retrieval of antibody-secreting hybridomas in cell arrays based on the dielectrophoresis2022

    • 著者名/発表者名
      Misaki Hata, Masato Suzuki, Tomoyuki Yasukawa
    • 雑誌名

      Biosensors and Bioelectronics

      巻: 209 ページ: 114250

    • DOI

      10.1016/j.bios.2022.114250

    • 査読あり
  • [雑誌論文] 電極表面の活性化に基づく電気化学DNAセンシング2022

    • 著者名/発表者名
      安川智之, 鈴木雅登
    • 雑誌名

      表面技術

      巻: 73 ページ: 427-433

    • 査読あり
  • [学会発表] 誘電泳動挙動によるリポソームの電気特性評価2023

    • 著者名/発表者名
      安川智之、波多美咲、鈴木雅登
    • 学会等名
      電気化学会第90回大会
  • [学会発表] 一括電気回転計測に基づく,細胞膜形態変化を伴う T細胞の免疫活性化の検出2023

    • 著者名/発表者名
      鈴木雅登、藤本 萌、安川智之
    • 学会等名
      電気化学会第90回大会
  • [学会発表] 多点電気化学測定によるゼブラフィッシュ胚内の NAD(P)Hデヒドロゲナーゼ活性測定2023

    • 著者名/発表者名
      石 川蓮珠、鈴木雅登、安川智之
    • 学会等名
      電気化学会第90回大会
  • [学会発表] 誘電泳動によるリポソームの膜容量評価とそれを指標とした脂質二分子膜のイオン透過性のモニ タリング2022

    • 著者名/発表者名
      波多美咲,鈴木雅登,安川智之
    • 学会等名
      第82回分析化学討論会
  • [学会発表] マイクロウェルアレイ型3極式電気回転デバイスの開発と電気回転による化学刺激時の細胞応答のモニタリング2022

    • 著者名/発表者名
      山田稜河,鈴木雅登,安川智之
    • 学会等名
      第82回分析化学討論会
  • [学会発表] 微粒子表面での抗原-VHH抗体反応に由来した微粒子表面導電率の変化を利用した抗原検出法の開発2022

    • 著者名/発表者名
      松本惇希,鈴木雅登,安川智之
    • 学会等名
      化学とマイクロ・ナノシステム学会第45回研究会
  • [学会発表] 回転速度を指標とした薬剤刺激によって誘導される細胞膜容量の変化の検出 ―画像解析による細胞の電気回転速度の経時変化解析―2022

    • 著者名/発表者名
      鈴木雅登,鶴田未央,Shee Chean Fei,内田誠一,安川智之
    • 学会等名
      化学とマイクロ・ナノシステム学会第45回研究会
  • [学会発表] 交流電場による細胞の回転運動を利用した、非標識に細胞の誘電特性を計測する電極デバイスの開発2022

    • 著者名/発表者名
      鈴木雅登、鶴田美央、Fei Chean Shee, 内田誠一、安川智之
    • 学会等名
      第60回 日本生物物理学会年会
  • [学会発表] VHH抗体修飾粒子の誘電泳動現象を用いた抗原検出における微粒子サイズの依存性の評価2022

    • 著者名/発表者名
      松本惇希, 鈴木雅登, 安川智之
    • 学会等名
      2022年電気化学秋季大会
  • [学会発表] 四電極を持つマイクロウエルデバイスによる細胞の網羅的電気回転計測と単一細胞の選択的操作2022

    • 著者名/発表者名
      鈴木雅登, 鶴田未央, Shee Chean Fei, 内田誠一, 安川智之
    • 学会等名
      2022年電気化学秋季大会
  • [学会発表] 細胞群に存在する標的細胞を分離してアレイ化する技術の開発2022

    • 著者名/発表者名
      酒井健登, 鈴木雅登, 安川智之
    • 学会等名
      2022年電気化学秋季大会
  • [学会発表] 3次元グリッド電極デバイスを用いた一括電気回転による T細胞集団からの活性化誘導細胞の識 別2022

    • 著者名/発表者名
      藤本 萌, 鈴木雅登, 安川智之
    • 学会等名
      日 本分析化学会第71年会
  • [学会発表] 一 括電気回転による赤血球様細胞への分化の非標識な評価法の開発2022

    • 著者名/発表者名
      鈴木雅登, 鶴田未央, 竹内梨乃, Shee Chean Fei, 内田誠一, 安川智之
    • 学会等名
      日 本分析化学会第71年会
  • [学会発表] 金属粒子を内包したオニオンライ クカーボンで修飾したマイクロ電極の作製と酸素還元応答の評価2022

    • 著者名/発表者名
      武内森史, 鈴木雅登, 小寺史浩, 安川智之
    • 学会等名
      第68 回ポーラログラフィーおよび電気分析化学討論会
  • [学会発表] ハイドロゲルに包埋したゼブラフ ィッシュ胚の呼吸活性の多点電気化学による測定2022

    • 著者名/発表者名
      石川蓮珠, 寺尾和輝, 鈴木雅登, 安川智之
    • 学会等名
      第68 回ポーラログラフィーおよび電気分析化学討論会
  • [学会発表] 誘電泳動を利用した特定サイズのリポソームの選択的捕捉2022

    • 著者名/発表者名
      波多美咲, 鈴木雅登, 安川智之
    • 学会等名
      化学とマイクロ・ナノシステム学会第46回研究会
  • [学会発表] 多点電気化学デバイスによるハイドロゲルに包埋したゼブラフィッシュ胚の呼吸活性測定2022

    • 著者名/発表者名
      石川蓮珠, 鈴木雅登, 安川智之
    • 学会等名
      化学とマイクロ・ナノシステム学会第46回研究会
  • [学会発表] 誘電泳動を利用した異種細胞の位置選択的捕捉と共培養システムの開発2022

    • 著者名/発表者名
      江口瑠, 鈴木雅登, 安川智之
    • 学会等名
      化学とマイクロ・ナノシステム学会第46回研究会
  • [学会発表] Estimation of membrane capacitance of bilayers containing cholesterol based on dielectrophoresis of liposomes2022

    • 著者名/発表者名
      Misaki HATA, Masato SUZUKI, Tomoyuki YASUKAWA
    • 学会等名
      32nd MRS-J
    • 国際学会
  • [学会発表] Cellular Responses to Chemical Stimuli based on an Electrorotation by Microwell Arrays with Three-electrodes2022

    • 著者名/発表者名
      Ryoga Yamada, Masato Suzuki, Tomoyuki Yasukawa
    • 学会等名
      32nd MRS-J
    • 国際学会
  • [学会発表] Selective Retrieval of Target Cells in a Cell-Based Array by Dielectrophoresis2022

    • 著者名/発表者名
      Tomoyuki Yasukawa
    • 学会等名
      15th International Symposium on Nanomedicine (ISNM2022)
    • 国際学会 / 招待講演
  • [備考] 化学分析学講座 ー兵庫県立大学ー

    • URL

      https://www.sci.u-hyogo.ac.jp/material/analytical_chem/index-j.html

  • [産業財産権] 回転体の速度を算出する方法2022

    • 発明者名
      鈴木雅登,安川智之
    • 権利者名
      鈴木雅登,安川智之
    • 産業財産権種類
      特許
    • 産業財産権番号
      特願2022-068169

URL: 

公開日: 2023-12-25  

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