| 研究課題/領域番号 |
20H03141
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
加藤 大貴 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 農学特定研究員 (60843216)
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| 研究分担者 |
谷口 智憲 京都大学, 医学研究科, 特定講師 (40424163)
西村 亮平 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 教授 (80172708)
富安 博隆 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 准教授 (70776111)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 犬 / 腫瘍 / 腫瘍免疫療法 / CAR-T細胞 / HER2 / GPC1 / ポドプラニン / 細胞療法 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、申請者が同定してきた犬固形腫瘍に特異的に過剰発現する標的抗原であるHER2およびGPC1、PDPNを標的としたキメラ抗原受容体CAR-T細胞製剤を、犬T細胞株を用いて作製し、その製材化を目指している。
本年度は、分担者より分与された犬T細胞株の性状解析および、遺伝子改変によるCAR-T細胞製剤への応用性検証のための、in vitro実験およびCARベクターの作製を行った。
分与された犬T細胞株2株(UL-1およびCL-1)および犬B細胞株(GL-1)の比較による性状解析を行なったところ、犬T細胞株2株ではT細胞株に特徴的なマーカーを発現していた。これら犬T細胞株2株にConcanavarinA添加による非特異的な刺激を加えたところ、UL-1ではサイトカイン発現や増殖などに変化が認められなかったものの、CL-1ではConcanavarinAの添加濃度依存的なサイトカイン発現および増殖の増加が認められた。そこで、現在、CL-1を製剤化のための最有望細胞株として選択し、優先的に解析を進めるとともに、CARベクターの導入の準備を進めている。
犬HER2またはGPC1,PDPNに対する抗体配列および犬共刺激分子配列を用いたCARベクターの設計およびレトロウィルス発現ベクターへの組み込み、増幅が完了した。抗体配列については、我々がこれまでに用いてきた基地の配列情報を用いた。犬共刺激分子配列については、犬CD3zおよびCD28配列について、人およびマウスCARベクターで用いられている配列との比較により、必要配列を切り出し、上記の抗体配列と連結した。レトロウィルスベクターは、Takara社の「pRetroX-IRES-ZsGreen1 vector」を用いて、CAR-T細胞の蛍光識別が可能な設計とした。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
初年度、新型コロナ感染症対策による影響を大きく受けたものの、今年度は製剤化に最適な犬T細胞株を同定し、CARベクターの設計やCrisperCas9法によるノックアウトの準備が整い、CAR-T細胞製剤作製の目処が立ったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
2021年度までに、最適な犬T細胞株の同定およびCARベクターの設計・増幅が完了したので、それらを用いてCAR-T細胞製剤を作成し、in vitro, in vivo実験にて仮説検証を進めていく。
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