研究課題
1）Pib2によるTORC1活性化機構の解明TORC1構成因子Kog1とフレキシブルなリンカーペプチドで繋いだPib2（Kog1-Pib2）は、グルタミン依存的TORC1活性化能を保持しながらも、Pib2単体と比較して可溶性が大きく改善されていた。このKog1-Pib2を含んだTORC1標品を用いて、グルタミンに依存したTORC1-Pib2の構造変化を化学的架橋部位の変化として検出しようとしたが、変化は認められたものの化学量論的な産物は得られず、構造変化の実体を明らかにするには至らなかった。2）Gtr依存的アミノ酸検知機構の解明Gtr1/2ヘテロ2量体は、アミノ酸存在下においては活性化状態になりTORC1を活性化するが、アミノ酸欠乏下においては不活性化状態になりTORC1の活性を抑制する。この制御の一部は、進化的に保存されたGtr1のGAP複合体（哺乳類GATOR複合体、酵母SEAC複合体）の活性が、アミノ酸に応答して調節されることによる。その調節機構の手がかりを得るために、アミノ酸欠乏条件においても活性が低下しないSEAC複合体の変異体のスクリーニングをin vivo mutagenesis法により行った。mutagenesisが飽和したと考えられるクローン数をスクリーニングしたが、得られた候補の変異体はいずれも活性化の程度が弱く、単一のアミノ酸置換では求める変異は得られないと結論した。3）植物のPib2オルソログの同定シロイヌナズナのFREE1/FYVE1はPib2と配列相同性が認められる。酵母Pib2の知見をもとにdominant negative変異体を作製し植物培養細胞で高発現したところTORC1活性の低下が見られ、FREE1/FYVE1はPib2のオルソログである可能性が考えられた。
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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