骨髄由来肝臓修復細胞による高効率肝臓再生療法の先制的適応拡大研究と機序解明

2022 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20H03663
• 研究機関: 山口大学
• 研究代表者: 坂井田 功 山口大学, その他部局等, 名誉教授 (80263763)
• 研究分担者: 山本 直樹 山口大学, 教育・学生支援機構, 教授 (90448283) ; 高見 太郎 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (60511251) ; 松本 俊彦 山口大学, 大学院医学系研究科, 講師 (70634723) ; 藤澤 浩一 産業医科大学, 産業生態科学研究所, 教授 (00448284)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: 再生医療 / 間葉系幹細胞 / 骨髄細胞 / 肝線維化 / 肝脂肪化

研究実績の概要

MSC投与後の肝組織を浮遊切片法による高感度免疫電顕法とFEI社製の透過型電子顕微鏡Tecnai12BTと走査型電子顕微鏡Qunta3D FEG DualBeamシステムを用いることで二種類の骨髄由来肝臓修復細胞である核N/C比の高い小型細胞と類円形の大型細胞の形態学的変化を解析しトモグラフィーによる微細構造と３Ｄ立体構造構築による解析で高い核N/C比EpCAM陽性細胞とCXCR4陽性細胞と類円形のMMP9陽性細胞の形態特徴解析を行った。
GFPTGマウス全骨髄細胞からMSCを分離(Veritas Easy step kit ST19771を使用)継代し培養GFP陽性骨髄由来間葉系細胞(MSC)を確立し、持続肝障害(CCL4)モデルにPassage1～4までのそれぞれの培養細胞群を静脈投与した場合と脾臓投与した場合で肝組織でのSirius Red染色での肝線維化改善効果の比較検討を行い、結果として脾臓投与群の方が肝線維化抑制効果を認めた。
我々が新規開発した代謝系異常のAK5KOマウスを作成して、GFP陽性骨髄由来間葉系細胞(MSC)を投与し、肝臓内での投与した細胞の動態と機能解析を行った。我々が開発した肝脂肪化悪化モデル(AK3KOマウス)にGAN特殊飼料投与＋CCL4による肝線維化合併モデルを作成し、肝組織線維化・脂肪化環境下で肝細胞や星細胞等の変化を電子顕微鏡等で評価を開始し、このモデルにMSCを脾臓投与し、線維化・脂肪化抑制効果の評価と動態解析を行った。我々が新規開発した代謝系異常のAK3KOマウスとAK5KOマウスにGAN食投与を開始してMAFLDモデルを作成し、そのモデルにGFP陽性骨髄由来間葉系細胞(MSC)を脾臓投与あるいは静脈投与して肝臓内での投与した細胞の動態と肝線維化と脂肪化に対する効果解析を行った。

現在までの達成度 (段落)

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Adenylate Kinase Isozyme 3 Regulates Mitochondrial Energy Metabolism and Knockout Alters HeLa Cell Metabolism (2022)
  • 著者名/発表者名: Fujisawa K, Wakazaki M, Matsuzaki A, Matsumoto T, Yamamoto N, Noma T, Takami T.
  • 雑誌名: Int J Mol Sci. 巻: 23(8) ページ: 4316-4320
  • DOI: 10.3390/ijms23084316
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] An iron chelation-based combinatorial anticancer therapy comprising deferoxamine and a lactate excretion inhibitor inhibits the proliferation of cancer cells (2022)
  • 著者名/発表者名: Fujisawa K, Takami T, Matsumoto T, Yamamoto N, Yamasaki T, Sakaida I.
  • 雑誌名: Cancer Metab. 巻: 10(1) ページ: 8-11
  • DOI: 10.1186/s40170-022-00284-x
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Evaluation of the Effects of Microgravity on Activated Primary Human Hepatic Stellate Cells (2022)
  • 著者名/発表者名: Fujisawa K, Nishimura Y, Sakuragi A, Duponselle J, Matsumoto T, Yamamoto N, Murata T, Sakaida I, Takami T.
  • 雑誌名: Int J Mol Sci. 巻: 23(13) ページ: 7429-7435
  • DOI: 10.3390/ijms23137429
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Involvement of DNA Damage Response via the Ccndbp1-Atm-Chk2 Pathway in Mice with Dextran-Sodium-Sulfate-Induced Colitis (2022)
  • 著者名/発表者名: Horigome R, Kamimura K, Niwa Y, Ogawa K, Mizuno KI, Fujisawa K, Yamamoto N, Takami T, Sugano T, Sakamaki A, Kamimura H, Takamura M, Terai S.
  • 雑誌名: J Clin Med. 巻: 11(13) ページ: 3674-3680
  • DOI: 10.3390/jcm11133674.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Cyclin D1 Binding Protein 1 Responds to DNA Damage through the ATM-CHK2 Pathway (2022)
  • 著者名/発表者名: Niwa Y, Kamimura K, Ogawa K, Oda C, Tanaka Y, Horigome R, Ohtsuka M, Miura H, Fujisawa K, Yamamoto N, Takami T, Okuda S, Ko M, Owaki T, Kimura A, Shibata O, Morita S, Sakai N, Abe H, Yokoo T, Sakamaki A, Kamimura H, Terai S.
  • 雑誌名: J Clin Med. 巻: 11(3) ページ: 851-857
  • DOI: 10.3390/jcm11030851.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Comparison of two primer-probe sets of Fusobacterium nucleatum using droplet digital polymerase chain reaction for the detection of colorectal neoplasia from faecal samples (2022)
  • 著者名/発表者名: Yamaoka Y, Sasai M, Suehiro Y, Hashimoto S, Goto A, Yamamoto N, Suzuki N, Higaki S, Fujii I, Suzuki C, Matsumoto T, Hoshida T, Koga M, Tsutsumi T, Lim LA, Matsubara Y, Tomochika S, Yoshida S, Hazama S, Yotsuyanagi H, Nagano H, Sakaida I, Takami T, Yamasaki T.
  • 雑誌名: Ann Clin Biochem. 巻: 59(6) ページ: 396-403
  • DOI: 10.1177/00045632221115559.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 医師主導治験「自己完結型肝硬変再生療法」の開発とNASH肝硬変への有効性評価 (2022)
  • 著者名/発表者名: 高見太郎, 松本俊彦, 大田久美江, 児玉雅季, 藤村瑠意, 小島奈緒美, 山本直樹, 坂井田功
  • 学会等名: 第21回 日本再生医療学会総会
• [学会発表] 培養自己骨髄間葉系幹細胞投与療法に対するexosomeを用いた補助療法の開発 (2022)
  • 著者名/発表者名: 原和冴, 松本俊彦, 藤澤浩一, 山本直樹, 高見太郎
  • 学会等名: 第21回 日本再生医療学会総会
• [学会発表] 肝線維化研究Revisited-肝臓学のBiologyからTranslationalへ 肝星細胞とマクロファージの細胞間相互作用におけるmiR-142-3pの役割 (2022)
  • 著者名/発表者名: 松本 俊彦, 山本 直樹, 高見 太郎
  • 学会等名: 第58回日本肝臓学会総会
• [学会発表] 高齢者肝硬変治療の現状と再生医療の期待 (2022)
  • 著者名/発表者名: 高見 太郎
  • 学会等名: 第24回日本高齢消化器病学会
  • 招待講演
• [備考] 山口大学大学院医学系研究科 消化器内科
  • URL: https://www.ichinai-yamaguchi.jp/