急性NK白血病における腫瘍微小環境解析

2020 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20H03716
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 幸谷 愛 東海大学, 医学部, 教授 (00517477)
• 研究分担者: 前田 高宏 九州大学, 医学研究院, 教授 (00791972) ; 半田 寛 群馬大学, 医学部附属病院, 准教授 (90282409)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: がん微小環境

研究実績の概要

Crispr/Cas9 in vivo screeningに必要なguide RNAライブラリーがコロナの影響で到着が大幅に遅れたため、ライブラリーの至適化および確認は令和2年度末には未施行となった。しかし、代わりに、発現量や下流シグナル分子の変化の有無からCancidate アプローチにて、複数の分子に対して個々の遺伝子欠損ANKLPDXマウスを作成し、その解析によって、複数個の治療標的を同定した。一部については、既に抗体による治療効果の検討の準備も進めている。星細胞由来腫瘍生存維持液性因子については同定に至り、作用機序に対する解析を解析している。
感染効率最大化やCRISPR活性評価については終了した。guideRNA導入条件至摘化・均等なライブラリーを確認した。
・guide RNAを導入・giude RNA次世代シークエンサー解析・バイオインフォマティクス解析については、ライブラリーの入手が遅れたため、行えなかった。
・個々の遺伝子欠損ANKLPDXマウスの解析については、キャンディデートアプローチによる既に複数個の分子を再現性も持って同定した。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

前述の通り、Crispr/Cas9 in vivo screeningに必要なguide RNAライブラリーがコロナの影響で到着が大幅に遅れたため、ライブラリーの至適化および確認は令和2年度末には未施行となったが、、代わりに、発現量や下流シグナル分子の変化の有無からCancidate アプローチにて、複数の分子に対して個々の遺伝子欠損ANKLPDXマウスを作成し、その解析によって、複数個の治療標的を同定したため、成果には結実する結果を得ている。更にマウス生体内CRISPRライブラリースクリーニングを可能とする準備も感染効率最大化やCRISPR活性評価については終了した。guideRNA導入条件至摘化・均等なライブラリーを確認し,整っているため、R3年度の施行が可能と考えられているため。

今後の研究の推進方策

既に同定に至った治療標的分子の治療効果を、阻害抗体、阻害剤などを用いて検討する。マウス生体内CRISPRライブラリースクリーニングを用いて、網羅的に、治療標的の同定を行い、予後が非常に不良である急性NK白血病の新規治療開発に結実させる。

研究成果

• [雑誌論文] Proteomic and phospholipidomic characterization of extracellular vesicles inducing tumor microenvironment in Epstein-Barr virus-associated lymphomas. (2021)
  • 著者名/発表者名: Ito M, Kudo K, Higuchi H, Otsuka H, Tanaka M, Fukunishi N, Araki T, Takamatsu M, Ino Y, Kimura Y, Kotani A.
  • 雑誌名: FASEB J. 巻: 35 ページ: e21505,
  • DOI: 10.1096/fj.202002730R.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of ERV3-1 in leukocytes of acute myelogenous leukemia patients (2021)
  • 著者名/発表者名: So Nakagawa, Masaharu Kawashima, Yuji Miyatake, Kai Kudo, Ryutaro Kotaki, Kiyoshi Ando, Ai Kotani.
  • 雑誌名: Gene. 巻: 773 ページ: 145363
  • DOI: 10.1016/j.gene.2020.145363.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Extracellular vesicles secreted by HBV-infected cells modulate HBV persistence in hydrodynamic HBV transfection mouse model. (2020)
  • 著者名/発表者名: Masatoshi Kakizaki, Yuichiro Yamamoto, Motoyuki Otsuka, Kouichi Kitamura, Masatoshi Ito, Hideki Derek Kawai, Masamichi Muramatsu, Tatehiro Kagawa, Ai Kotani.
  • 雑誌名: The Journal of biological chemistry. 巻: 295(35) ページ: 12449-12460
  • DOI: 10.1074/jbc.RA120.014317
  • 査読あり
• [雑誌論文] Overexpression of miR0669m inhibits erythroblast differentiation (2020)
  • 著者名/発表者名: Ryutaro Kotaki, Masaharu Kawashima, Ai Kotani. et al.
  • 雑誌名: Scientific reports 巻: 10(1) ページ: 13554
  • DOI: 10.1038/s41598-020-70442-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] PD-L1/L2 protein levels rapidly increase on monocytes via trogocytosis from tumor cells in classical Hodgkin lymphoma. (2020)
  • 著者名/発表者名: Masaharu Kawashima, Joaquim Carreras,Ai Kotani. et al.
  • 雑誌名: Leukemia 巻: 34 ページ: 2405-2417
  • DOI: 10.1038/s41375-020-0737-9
  • 査読あり
• [雑誌論文] Interferon-γ induced PD-L1 expression and soluble PD-L1 production in gastric cancer. (2020)
  • 著者名/発表者名: Yushi Imai, Tetsuhiro Chiba, Takayuki Kondo, Hiroaki Kanzaki, Kengo Kanayama, Junjie Ao, Ryuta Kojima, Yuko Kusakabe, Masato Nakamura, Tomoko Saito, Ryo Nakagawa, Eiichiro Suzuki, Shingo Nakamoto, Ryosuke Muroyama, Akinobu Tawada, Tomoaki Matsumura, Tomoo Nakagawa, Jun Kato, Ai Kotani, Hisahiro Matsubara, Naoya Kato.
  • 雑誌名: Oncology letters. 巻: 20(3) ページ: 2161-2168
  • DOI: 10.3892/ol.2020.11757
  • 査読あり
• [雑誌論文] Heat-Killed Fusobacterium nucleatum Triggers Varying Heme-Related Inflammatory and Stress Responses Depending on Primary Human Respiratory Epithelial Cell Type. (2020)
  • 著者名/発表者名: Ryo Koike, Marni E Cueno, Keiko Nodomi, Muneaki Tamura, Noriaki Kamio, Hajime Tanaka, Ai Kotani, Kenichi Imai.
  • 雑誌名: Molecules. 巻: 25(17) ページ: 3839
  • DOI: 10.3390/molecules25173839
  • 査読あり
• [雑誌論文] PD-L1 is induced on hepatocyte surface via CKLF-like MARVEL transmembrane domain-containing protein 6 upregulation by the anti-HBV drug Entecavir. (2020)
  • 著者名/発表者名: 8.Yuichiro Yamamoto, Masatoshi Kakizaki, Ai Kotani. et al.
  • 雑誌名: International immunology. 巻: 32(8) ページ: 519-531
  • DOI: 10.1093/intimm/dxaa018
  • 査読あり
• [雑誌論文] Dasatinib exacerbates splenomegaly of mice inoculated with Epstein-Barr virus-infected lymphoblastoid cell lines. (2020)
  • 著者名/発表者名: Ryutaro Kotaki, Masaharu Kawashima, Yuichiro Yamamoto, Hiroshi Higuchi, Etsuko Nagashima, Natsumi Kurosaki, Masako Takamatsu, Yara Yukie Kikuti, Ken-Ichi Imadome, Naoya Nakamura, Ai Kotani.
  • 雑誌名: Scientific reports. 巻: 10(1) ページ: 4355
  • DOI: 10.1038/s41598-020-61300-y
  • 査読あり