神経細胞死の前段階で変化する毒性マーカーを指標にした高感度神経毒性評価系の構築

2022 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20H04342
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 古武 弥一郎 広島大学, 医系科学研究科(薬), 教授 (20335649)
• 研究分担者: 佐能 正剛 和歌山県立医科大学, 薬学部, 准教授 (00552267) ; 宮良 政嗣 広島大学, 医系科学研究科(薬), 助教 (60816346)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2024-03-31
• キーワード: 神経毒性評価 / 核呼吸因子-1

研究実績の概要

昨年度までに確立したNRF-1レポーター遺伝子を導入した細胞を用いて，本年度も引き続き各種化学物質のNRF-1活性と細胞毒性評価を行った．特に今年度は神経突起伸長とNRF-1活性，細胞生存の関係を明らかにするため，Neuro2A細胞にNREレポーター遺伝子を導入し，分化誘導剤を添加した状態で実験に用いた．NRF-1活性をレポーターのEGFP緑色で（96ウェルプレートの6ウェルの平均をコントロール群の平均で割って活性を算出），Thermo社 のNeurite Outgrowth Staining Kitを使用し，生細胞をカルセインの青色で，神経突起を赤色で染色し，High Content Screening装置Opera Phenix（Perkin Elmer）を用いて神経突起長などを計測することによるアッセイの自動化を試みた．実験条件を確立するためのモデル化合物としてトリブチルスズ (TBT) を30 nMから3 microMの濃度で用いた．しかしながらNeuro2Aの分化誘導条件の検討などに手間取り，神経突起の自動認識も困難を極めたため，NRF-1, 生細胞，神経突起３者の自動定量化には至らなかった．今後実験系を精査し，アッセイ系を確立する予定である．

現在までの達成度 (段落)

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Methylmercury Decreases AMPA Receptor Subunit GluA2 Levels in Cultured Rat Cortical Neurons (2023)
  • 著者名/発表者名: Ishida Keishi、Takeda Kazuki、Takehara Yuki、Takabayashi Tomoki、Miyara Masatsugu、Sanoh Seigo、Kawai Hidehiko、Ohta Shigeru、Kotake Yaichiro
  • 雑誌名: Biological and Pharmaceutical Bulletin 巻: 46 ページ: 292～300
  • DOI: 10.1248/bpb.b22-00744
  • 査読あり
• [雑誌論文] Establishment of hyperoxic cell culture system for predicting drug-induced liver injury: reducing accumulated lipids in hepatocytes derived from chimeric mice with humanized liver (2023)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuki Yuya、Sanoh Seigo、Yamao Mikaru、Kojima Yuha、Kotake Yaichiro、Tateno Chise
  • 雑誌名: The Journal of Toxicological Sciences 巻: 48 ページ: 99～108
  • DOI: 10.2131/jts.48.99
  • 査読あり
• [雑誌論文] Tributyltin activates the Keap1-Nrf2 pathway via a macroautophagy-independent reduction in Keap1 (2023)
  • 著者名/発表者名: Hatano Misaki、Hatamiya Shunichi、Miyara Masatsugu、Kotake Yaichiro
  • 雑誌名: The Journal of Toxicological Sciences 巻: 48 ページ: 161～168
  • DOI: 10.2131/jts.48.161
  • 査読あり
• [雑誌論文] Assessment of metabolic activation of felbamate in chimeric mice with humanized liver in combination with in vitro metabolic assays (2022)
  • 著者名/発表者名: Sato Koya、Sanoh Seigo、Ishida Yuji、Tateno Chise、Ohta Shigeru、Kotake Yaichiro
  • 雑誌名: The Journal of Toxicological Sciences 巻: 47 ページ: 277～288
  • DOI: 10.2131/jts.47.277
  • 査読あり
• [雑誌論文] Trehalose decreases mRNA and protein expressions of c-Jun and JunB in human cervical cancer HeLa cells (2022)
  • 著者名/発表者名: Umeda-Miyara Kanae、Miyara Masatsugu、Sanoh Seigo、Kotake Yaichiro
  • 雑誌名: The Journal of Biochemistry 巻: 172 ページ: 177～187
  • DOI: 10.1093/jb/mvac051
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improved Predictability of Hepatic Clearance with Optimal pH for Acyl-Glucuronidation in Liver Microsomes (2022)
  • 著者名/発表者名: Mizutare Tohru、Sanoh Seigo、Kanazu Takushi、Ohta Shigeru、Kotake Yaichiro
  • 雑誌名: Journal of Pharmaceutical Sciences 巻: 111 ページ: 3165～3173
  • DOI: 10.1016/j.xphs.2022.08.015
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prenatal exposure to valproic acid causes allodynia associated with spinal microglial activation (2022)
  • 著者名/発表者名: Imado Eiji、Sun Samnang、Abawa Abrar Rizal、Tahara Takeru、Kochi Takahiro、Huynh Tran Ngoc Bao、Asano Satoshi、Hasebe Shigeru、Nakamura Yoki、Hisaoka-Nakashima Kazue、Kotake Yaichiro、Irifune Masahiro、Tsuga Kazuhiro、Takuma Kazuhiro、Morioka Norimitsu、Kiguchi Norikazu、Ago Yukio
  • 雑誌名: Neurochemistry International 巻: 160 ページ: 105415～105415
  • DOI: 10.1016/j.neuint.2022.105415
  • 査読あり / 国際共著
• [学会発表] 発達神経毒性物質に共通する発現変動遺伝子の探索 (2023)
  • 著者名/発表者名: 藤原 涼雅、宮良 政嗣、竹原 有希、高林 智樹、山本 佑樹、田原 栄俊、古武 弥一郎
  • 学会等名: 日本薬学会第143年会