• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2021 年度 実績報告書

難治性固形癌への効率的抗体デリバリーを可能とする二段階送達システムの開発

研究課題

研究課題/領域番号 20J11536
研究機関熊本大学

研究代表者

山内 聡一郎  熊本大学, 薬学教育部, 特別研究員(DC2)

研究期間 (年度) 2020-04-24 – 2022-03-31
キーワード環状一本鎖抗体 / インテイン反応 / Diabody / avidity効果 / PEG化
研究実績の概要

以下に本年度の研究において得られた知見をまとめる。
(1)インテイン反応を利用した大腸菌体内環状scFv調製法を用いてTrastuzumab由来の環状scFv(Tras-scFv)を調製した。本手法で調製した環状scFvは連結部分に新たなシステイン残基が導入される。このシステイン残基を利用してscFvの欠点である抗原結合価数の減少による抗原結合力の低下を補うために、チオール反応性の官能基を持つ架橋剤を用いて環状Tras-scFv二量体を調製した。表面プラズモン共鳴(SPR)測定の結果、環状Tras-scFv単量体と比較して、環状Tras-scFv二量体はavidity効果により抗原結合力が向上していることを確認した。
(2)環状scFvの保存安定性および血中滞留性の向上を目指し、環状Tras-scFv中のシステイン残基に対して様々な分子量の直鎖型および分岐型PEG鎖を部位特異的に修飾したPEG化環状scFvを調製した。Trastuzumab-HER2複合体立体構造から、PEG修飾部位はscFvの抗原認識部位とは反対側に位置することを確認したため、PEG修飾は環状scFvの抗原結合活性に影響を与えないと予想した。実際にSPR測定による解析を行った結果、PEG修飾による抗原結合活性の大幅な低下は確認されなかった。続いて、保存安定性に関して検討した結果、PEG修飾により耐熱性および凍結乾燥後の溶解性が有意に向上することが明らかとなった。また、健常マウスを用いた体内動態解析を行った結果、PEG修飾による分子量増大に伴い、環状Tras-scFvの消失半減期が最大で15倍延長した。

現在までの達成度 (段落)

令和3年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和3年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2021 その他

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (1件) 図書 (1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Molecular recognition of a single-chain Fv antibody specific for GA-pyridine, an advanced glycation end-product (AGE), elucidated using biophysical techniques and synthetic antigen analogues2021

    • 著者名/発表者名
      Kobashigawa Yoshihiro、Ohara Toshiya、Morita Kosuke、Toyota Yuya、Nakamura Teruya、Kotani Shunsuke、Arimori Takao、Yamauchi Soichiro、Liu Chenjiang、Wakeyama-Miyazaki Yukari、Suwa Yoshiaki、Uchida-Kamekura Makiyo、Fukuda Natsuki、Sato Takashi、Nakajima Makoto、Takagi Junichi、Yamagata Yuriko、Morioka Hiroshi
    • 雑誌名

      The Journal of Biochemistry

      巻: 170 ページ: 379~387

    • DOI

      10.1093/jb/mvab056

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] 一本鎖抗体の製剤特性改善に向けたPEG修飾の有用性評価2021

    • 著者名/発表者名
      山内聡一郎、佐藤卓史、小橋川敬博、水田夕稀、前田仁志、渡邉博志、丸山徹、森岡弘志
    • 学会等名
      第94回 日本生化学会大会
  • [図書] 創薬研究のための相互作用解析パーフェクト (第1章 II-12「ファージディスプレイ法を用いた一本鎖抗体の改変」)2021

    • 著者名/発表者名
      山内 聡一郎、小橋川 敬博、佐藤 卓史、森岡弘志
    • 総ページ数
      11
    • 出版者
      羊土社
    • ISBN
      978-4-7581-2256-6
  • [備考] 熊本大学 大学院生命科学研究部 生命分析化学分野ホームページ

    • URL

      http://seimeibunseki.org

URL: 

公開日: 2022-12-28  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi