| 研究課題/領域番号 |
20K05797
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分38020:応用微生物学関連
|
|---|
| 研究機関 | 福山大学 |
|---|
研究代表者 |
広岡 和丈 福山大学, 生命工学部, 教授 (20389068)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
| キーワード | 枯草菌 / タンパク質発現 / フラボノイド / ラムノース / ペクチン / T7 RNAポリメラーゼ |
|---|
| 研究成果の概要 |
枯草菌宿主で低毒性物質で誘導可能なタンパク質発現系の開発を行った。フラボノイド応答性プロモーター (PqdoI) とT7 RNAポリメラーゼ遺伝子 (T7 pol) との連結を染色体に組み込み、T7プロモーター制御下の目的遺伝子をもつプラスミドを導入し、フラボノイド誘導型T7発現系を作製した。また、T7 pol制御を担うPqdoIを改良して誘導条件での発現量を向上させた。
T7 pol制御領域をラムノースまたはペクチンに応答する各プロモーターに置換して、各糖で誘導されるT7発現系の作製を試みた。ペクチン誘導型では誘導までに長時間を要し、ラムノース誘導型では非誘導条件でも発現の漏れが認められた。
|
| 自由記述の分野 |
微生物学、分子生物学
|
| 研究成果の学術的意義や社会的意義 |
枯草菌は哺乳類に対して非病原性であり、本研究で用いたいずれの誘導物質も哺乳類への毒性が低いので、当該T7発現系によって目的タンパク質の有害物質フリーでの獲得が容易となる。フラボノイド誘導型発現系では、厳密な発現制御と高発現量を両立できており、目的タンパク質が宿主細胞の増殖に悪影響を及ぼす場合に有用となる。アグリコン形態のフラボノイドは疎水性が高いので、特定の輸送体を介さずに膜透過で細胞内に取り込み可能である。したがって、当該発現系の他の細菌宿主への移行が比較的容易であると考えられる。誘導物質の１つであるケルセチンが安価なこともこの発現系の産業利用の可能性を高めている。
|
