| 研究課題/領域番号 |
20K06228
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
長富 潔 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 教授 (40253702)
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| 研究分担者 |
平坂 勝也 長崎大学, 海洋未来イノベーション機構, 准教授 (70432747)
吉田 朝美 長崎大学, 水産・環境科学総合研究科(水産), 准教授 (80589870)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 活性酸素生成系 / 酸化ストレス / プロモーター / 転写制御因子 / 魚病細菌 / flagellin / 培養細胞系 / 免疫応答 |
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| 研究実績の概要 |
最終年度は、E.tarda強毒株、もしくは弱毒株の生菌をマウスマクロファージ系株化細胞RAW264.7に暴露し、食細胞NADPHオキシダーゼのタンパク質間相互作用、iNOSの発現誘導、更にはNO産生系における細胞内シグナル伝達系を検証した。ウェスタンブロット法によるNADPHオキシダーゼ構成タンパク質の発現解析の結果、細胞質に局在するNADPHオキシダーゼ活性化タンパク質p47phox及びp67phoxの細胞膜への移行が確認され、細胞内ROS産生への関与が示唆された。次いでリアルタイム定量PCR (qPCR) 並びにウェスタンブロット法によりE.tarda強毒株、もしくは弱毒株暴露に伴う iNOS mRNA及びiNOSタンパク質の発現誘導が確認され、そのレベルは弱毒株を暴露した細胞の方が有意に高かった。更に、MAPキナーゼ特異的阻害剤を用いてNO産生系における細胞内シグナル伝達経路を検証した結果、E.tarda強毒株、もしくは弱毒株暴露に伴うNO産生量及びiNOS mRNA発現量はJNK特異的阻害剤によって有意に減少した。これによりE.tarda暴露に伴うRAW264.7細胞内のNO産生系においてJNK経路の関与が示唆された。
本研究を通じてE.tarda強毒株及びE.tarda強毒株由来flagellinによるマクロファージ培養細胞の免疫応答、E.tarda強毒株、もしくは弱毒株暴露に伴う活性酸素生成系の食細胞NADPHオキシダーゼのタンパク質間相互作用、誘導型NO合成酵素 (iNOS) の発現誘導能、更にはNO産生系における細胞内シグナル伝達経路が明らかになった。
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