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2023 年度 実績報告書

牛白血病ウイルスの血中プロウイルス量と感染細胞数に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 20K06413
研究機関宮崎大学

研究代表者

関口 敏  宮崎大学, 産業動物防疫リサーチセンター, 教授 (10462780)

研究期間 (年度) 2020-04-01 – 2024-03-31
キーワード牛伝染性リンパ腫 / プロウイルス / デジタルPCR
研究実績の概要

牛伝染性リンパ腫ウイルス(BLV)はレトロウイルス科に属する逆転写酵素をもったRNAウイルスである。BLVは主にB細胞に感染し、宿主のDNA中にプロウイルスとして組み込まれ持続感染する。BLV感染牛は病態が進行すると、感染牛の2~3%がB細胞性のリンパ腫(EBL)を発症する。BLV感染の診断はELISAによる抗体検出の他、Nested PCR法やリアルタイムPCR(qPCR)法によるプロウイルス遺伝子の検出があり、qPCR法はプロウイルス量の定量も可能である。BLVに対するワクチンや治療法はなく、感染拡大を防ぐためにはBLV感染牛を摘発・淘汰または隔離飼育するしかない。しかし、米国や日本を含むアジア諸国ではBLVの感染率が非常に高いため、全てのBLV感染牛を淘汰することは難しい。そこでわが国では、BLV感染牛のプロウイルス量に基づく対策が推奨されている。一般的に血中プロウイルス量が高い感染牛ほど感染性や発症するリスクが高い。しかし、プロウイルス量だけでは説明できない感染牛も存在する。その理由として考えられていたのが、複数のプロウイルスが一つの細胞に感染する状態「マルチプロウイルス」である。筆者らはデジタルPCR技術によるBLVのプロウイルス量の絶対定量を開発し、その存在を確認した。デジタルPCRによる測定は、サンプルをパーティションに分けて行うため、個々の反応は標的分子がゼロか1個以上存在する状態になる。各パ-ティションは、エンドポイントPCRサイクルの後に、蛍光シグナルのあり(陽性反応)/なし(陰性反応)について解析し、サンプル内の分子の絶対数を算出することができる。これは、サンプルの標的定量用の検量線に依存しない。検量線への依存性を取り除くことで、エラーを減らし、精度を上げることが可能となる。筆者らはこの技術を確立し、BLVの新規診断検査法として実装することに成功した。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2023 その他

すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (2件) (うち国際共著 2件、 査読あり 2件、 オープンアクセス 2件)

  • [国際共同研究] ベンハー大学(エジプト)

    • 国名
      エジプト
    • 外国機関名
      ベンハー大学
  • [雑誌論文] Development of droplet digital PCR for quantification of bovine leukemia virus proviral load using unpurified genomic DNA2023

    • 著者名/発表者名
      Wu X, Notsu K, Matsuura Y, Mitoma S, El Daous H, Norimine J, Sekiguchi S.
    • 雑誌名

      J Virol Methods.

      巻: 315 ページ: 114706

    • DOI

      10.1016/j.jviromet.2023.114706.

    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Identifying Pathogen and Allele Type Simultaneously in a Single Well Using Droplet Digital PCR2023

    • 著者名/発表者名
      Notsu K, El Daous H, Mitoma S, Wu X, Norimine J, Sekiguchi S.
    • 雑誌名

      mSphere

      巻: 218 ページ: e0049322

    • DOI

      10.1128/msphere.00493-22

    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著

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公開日: 2024-12-25  

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