研究課題/領域番号 |
20K06433
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研究機関 | 山口大学 |
研究代表者 |
馬場 健司 山口大学, 共同獣医学部, 准教授 (90452367)
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研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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キーワード | 犬 / 胆嚢 / 肝臓 / 膵臓 / CFTR |
研究実績の概要 |
本年度は,主に嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator: CFTR)遺伝子解析の対象となる検体の収集,CFTR遺伝子の塩基配列解析の予備検討,CFTR遺伝子転写産物の解析および変異型CFTRの機能解析系の構築を行なった。検体の収集については,胆嚢粘液嚢腫等の胆嚢疾患および胆管疾患の検体は当初の予定数が確保された。一方,膵臓疾患の検体については検体数が不足しており,次年度も引き続き収集する。CFTR遺伝子の塩基配列解析については,全エクソンおよび各エクソン近傍のイントロン領域のPCR増幅系を確立した。これをもとに次年度から順次塩基配列解析を行う予定である。特に着目している既知の遺伝子多型については,別途ジェノタイピングアッセイにより検体数を増やして解析中である。また,CFTR遺伝子転写産物の解析では,胆嚢粘液嚢腫の1検体において一部のエクソンが欠損した転写産物が同定された。変異型CFTRの機能解析系の構築については,解析に適した培養細胞の検索および緑色蛍光タンパク質(Green Fluorescent Protein: GFP)融合CFTRの安定発現細胞の作製を試みた。培養細胞については,内在性CFTR発現の有無およびオルガノイド形成能を検討し,本研究に最も適切と考えられる培養細胞を決定した。この細胞にGFP融合CFTR遺伝子を導入した結果,GFP融合CFTRの発現が確認されたがその発現量は低レベルであった。現在,機能解析に適したGFP融合CFTRの発現レベルを得るため,いくつかの遺伝子発現システムを検討中である。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
検体の収集は概ね予定通りに進行したが,CFTRの遺伝子解析および機能解析に関しては解析手法を試行錯誤している段階であり,進行がやや遅れている。
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今後の研究の推進方策 |
CFTR遺伝子解析については,予算内での解析を実現するため,次世代シークエンス法からサンガーシークエンス法に変更し実施する。変異型CFTRの機能解析については,引き続き評価系の確立を目指す。
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次年度使用額が生じた理由 |
検体収集が予定よりやや遅延していることおよび遺伝子解析手法を変更したことにより残額が生じた。この残額は次年度に遺伝子解析費用として用いる。
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