| 研究課題/領域番号 |
20K06442
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
平舘 裕希 東北大学, 農学研究科, 助教 (20649157)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | ダイニン軽鎖 / 精子 / 不妊 / ノックアウトマウス |
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| 研究実績の概要 |
ダイニンは微小管どうしの滑りを調節するモータータンパクであり、重鎖、中間鎖、軽鎖から構成される。本研究課題はこれまでに見出した、軽鎖関連遺伝子ノックアウトマウスの詳細な表現型解析を行うことで精子の鞭毛形成を制御する新たな機構を明らかにすることを目的として行っている。また一般に軽鎖はダイニン複合体において重鎖の機能を調節するとされていることから、当該遺伝子がダイニン複合体の中で果たしている役割、特に重鎖の機能へ与える影響を調べることにより、知見を得ることを目指している。これらを明らかにすることで、将来的にはダイニンの機能不全に起因する精子の機能障害を回復させるアプローチを切り開きたい。
本年度はまず当該遺伝子の精巣内でのmRNAとタンパクの局在解析を試みた。In situ hybriidization及びPCRにより、mRNAの発現する細胞、時期は特定することができた。一方で市販の抗体は反応しないことが明らかとなり、リコンビナントタンパクの作製を通じてマウスに使用可能な抗体の作製を試みている。またノックアウトマウスに生じる形態異常を調べるために、組織切片標本に加え電子顕微鏡用の標本の作製、観察を行った。さらに不妊を呈し始める週齢についても交配試験により特定することができた。野生型とともに精巣のサンプリング、RNA抽出を行い、RNAseqによる関連遺伝子群の絞り込みを行う準備を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
概ね当初の計画通り進んでいるが、市販の抗体がマウスに対して使用できないことが判明したため、リコンビナントの作製から免疫を行い抗体の作製を試みている。タンパクの局在情報を明らかにすることは本課題において極めて重要であるため、良い反応性を示す抗体を獲得できるよう試行を続けている。
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| 今後の研究の推進方策 |
相互作用するタンパクを特定すべく、プルダウンアッセイに進む。タグ付リコンビナントを用いてアッセイを行い、候補を絞り込みKOマウスの作製を試みる。
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