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2023 年度 実績報告書

複雑脳発生を明らかにする新規組み換え酵素ノックイン技術の開発

研究課題

研究課題/領域番号 20K06464
研究機関東京大学

研究代表者

恒川 雄二  東京大学, 医科学研究所, 助教 (80733352)

研究期間 (年度) 2020-04-01 – 2024-03-31
キーワードLsCre
研究実績の概要

遺伝子工学的に細胞特異的な遺伝子発現をさせるためのノックイン(KI)モデル動物の作製が困難な生物種に対応できるように、さまざまな動物種において細胞特異的な遺伝子発現を実現する技術の開発を目指した。生後の動物においてde novo ノックインを行う際、ドナーとして細胞内に導入したCreが意図せず発現してしまい(リーク)、目的以外の細胞で遺伝子が発現してしまう現象が観察された。そこで、ノックインされるまでドナーから非特異的な遺伝子発現を抑えるためにコドン改変を行ったリークレスCre(LsCre)を開発した。LsCreはプラスミドを用いた電気穿孔法によるin vivo 遺伝子導入では予想通りリークしないことが確認された。次に狭い範囲でしか遺伝子導入できない電気穿孔法ではなく、全身で遺伝子導入のできるアデノ随伴ウイルス(AAV)にLsCreを組み込んで、in vivo 遺伝子導入を行った。その際に効率的にAAVを製造、精製する技術開発も行い、報告した。AAVにLsCreを組み込んでin vivo 遺伝子導入を行ったところ、予想外のリークが引き起こされる事実が新たに発見された。これは、AAVが発現する際に細胞内でコンカテマーと呼ばれる環状のDNA複合体を形成するためではないかと現在予想されている。今後はAAVにおいてもリークしない新たなLsCreの開発を進めていく。

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2023

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件、 オープンアクセス 4件)

  • [雑誌論文] Large-scale purification of functional AAV particles packaging the full genome using short-term ultracentrifugation with a zonal rotor2023

    • 著者名/発表者名
      Wada Mikako、Uchida Naoya、Posadas-Herrera Guillermo、Hayashita-Kinoh Hiromi、Tsunekawa Yuji、Hirai Yukihiko、Okada Takashi
    • 雑誌名

      Gene Therapy

      巻: 30 ページ: 641~648

    • DOI

      10.1038/s41434-023-00398-x

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Development of a novel purification method for AAV vectors using tangential flow filtration2023

    • 著者名/発表者名
      Miyaoka Rimi、Tsunekawa Yuji、Kurosawa Yae、Sasaki Takako、Onodera Azusa、Sakamoto Kenji、Kakiuchi Yuko、Wada Mikako、Nitahara‐Kasahara Yuko、Hayashita‐Kinoh Hiromi、Okada Takashi
    • 雑誌名

      Biotechnology and Bioengineering

      巻: 120 ページ: 3311~3321

    • DOI

      10.1002/bit.28524

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Engineering a highly durable adeno-associated virus receptor for analytical applications2023

    • 著者名/発表者名
      Yoshida Kouhei、Tsunekawa Yuji、Kurihara Kento、Watanabe Kazuya、Makino-Manabe Yuriko、Wada Mikako、Tanaka Toru、Ide Teruhiko、Okada Takashi
    • 雑誌名

      Molecular Therapy - Methods & Clinical Development

      巻: 31 ページ: 101157~101157

    • DOI

      10.1016/j.omtm.2023.101157

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] LONRF2 is a protein quality control ubiquitin ligase whose deficiency causes late-onset neurological deficits2023

    • 著者名/発表者名
      Li Dan、et al.,
    • 雑誌名

      Nature Aging

      巻: 3 ページ: 1001~1019

    • DOI

      10.1038/s43587-023-00464-4

    • 査読あり / オープンアクセス

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公開日: 2024-12-25  

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